[发明专利]一种基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法

权利要求书

1.一种基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法，其特征在于：将TMB溶液和纳米MnO₂混合后进行氧化孵育，孵育完成后过滤去除纳米MnO₂，得到蓝色oxTMB溶液，将oxTMB溶液、AuNCs溶液、含AA待测溶液混合反应，基于荧光内滤效应，通过测定溶液相对荧光强度和紫外吸收强度检测AA含量。

2.根据权利要求1所述的基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法，其特征在于：所述AuNCs具有荧光，且其荧光发射光谱与oxTMB的特征吸收光谱有重叠部分。

3.根据权利要求1所述的基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法，其特征在于：所述AuNCs荧光光谱的最大激发波长和最大发射波长分别为410nm和572nm。

4.根据权利要求1所述的基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法，其特征在于：所述AuNCs是以HAuCl₄·4H₂O为原料、谷胱甘肽为稳定剂制得。

5.根据权利要求1所述的基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法，其特征在于：所述氧化孵育具体为将3ml TMB溶液(2mM)和600μL MnO₂纳米片(4mg/mL)悬液依次加入80mL pH为4的HAc-NaAc(0.2mM)缓冲溶液中，搅拌并在室温下孵育1小时后，将混合物过滤去除MnO₂纳米片。

6.根据权利要求1所述的基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法，其特征在于：将200μL AuNCs(200μM)、1mL oxTMB(72μM，由TMB转化而来)和AA溶液混合在一起室温反应。

7.根据权利要求1所述的基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法，其特征在于具体包括如下步骤：

(1)配制不同浓度梯度的抗坏血酸标准溶液；

(2)将AuNCs、oxTMB和不同浓度的AA标准溶液混合在一起室温反应，分别记录溶液在572nm和652nm处的荧光发射峰和紫外吸收峰，将两种峰值变化与对应的抗坏血酸浓度进行线性拟合得到线性方程，建立抗坏血酸标准曲线；

(3)将oxTMB溶液、AuNCs溶液、含AA待测溶液混合反应，通过测定溶液相对荧光强度和紫外吸收强度检测AA含量。

8.根据权利要求7所述的基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法，其特征在于：所述抗坏血酸标准溶液不同浓度梯度为0-200μM。

9.根据权利要求1所述的基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法在检测饮料中抗坏血酸的应用，其特征在于：对饮料样品过滤并合理稀释，将200μL AuNCs(200μM)、1mL oxTMB(72μM)和200μL的样品溶液依次加入到2ml的PE离心管中，充分混合，室温孵育10分钟后，立即检测混合溶液的紫外吸收和荧光光谱，与抗坏血酸标准曲线比对后得到饮料中抗坏血酸含量。

10.根据权利要求1所述的基于金团簇和TMB比色荧光双信号检测抗坏血酸的方法在检测活细胞中抗坏血酸的应用，其特征在于：结合流式细胞术或荧光显微镜成像检测细胞内AA。