[发明专利]一种调控集胞藻中不饱和脂肪酸合成的方法及其应用

权利要求书

1.敲除spkG基因在降低蓝藻中多不饱和脂肪酸合成中的应用，所述spkG基因核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。

2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述多不饱和脂肪酸为亚油酸、γ-亚麻酸、α-亚麻酸和十八碳四烯酸。

3.一种降低集胞藻中多不饱和脂肪酸合成的方法II，其特征在于，包括步骤如下：

a用引物对spkG-F，spkG-R对集胞藻PCC6803基因组DNA进行PCR扩增，得到spkG基因，所述spkG基因核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；

b扩增后的spkG片段与pClone007 simple载体连接，然后转化入大肠杆菌DH5α中进行克隆，得到007-spkG质粒；

c将007-spkG质粒使用BamHⅠ内切酶进行酶切，将spkG基因切开，BamHⅠ内切酶的酶切位点前的spkG基因片段作为同源重组上游臂，酶切位点后的spkG基因片段作为同源重组下游臂；

d用BamHI内切酶酶切质粒pBluescript-Kan，回收卡那霉素片段，与同样经BamHI内切酶酶切的步骤c制得的质粒007-spkG连接，制得质粒007-spkG

-kan；

e将步骤d制得的重组载体007-spkG-kan转化到集胞藻PCC6803，经筛选，制得敲除spkG基因的集胞藻突变株。

4.如权利要求3所述降低集胞藻中多不饱和脂肪酸合成的方法II，其特征在于，所述步骤a中，spkG基因以集胞藻PCC6803基因组DNA为模板，进行PCR扩增获得，PCR扩增引物核苷酸序列为SEQ ID NO .3和SEQ ID NO .4。

5.如权利要求4所述降低集胞藻中多不饱和脂肪酸合成的方法II，其特征在于，所述步骤a中，PCR扩增体系如下：

2×M5 HiPer plus Taq HiFi PCR mix 10μL，模板DNA 1μL，引物spkG-F 1μL，引物spkG-R 1μL，ddH2 O 7μL，共计20μL；

PCR扩增程序如下：

95℃预变性3min，94℃变性25s，60℃复性25s，72℃延伸lmin，35个循环后，72℃终延伸5min，4℃保存。

6.权利要求3制备的敲除spkG基因的集胞藻突变株用于降低多不饱和脂肪酸的合成。