[发明专利]一种高效高特异性检测HPA基因型的方法和试剂盒

说明书

一种高效高特异性检测HPA基因型的方法和试剂盒，包括以下步骤：步骤1、多组HPA引物组与检测模板退火；步骤2、在DNA聚合酶的作用实现模板退火延伸；步骤3、延伸产物结合荧光基团显色或荧光探针在DNA聚合酶外切酶活性下释放报告基团；步骤4、通过熔解曲线或不同荧光探针标记实现对不同的HPA基因型进行检测实现了对HPA1～6,15,21多个位点基因的检测；实现了高效特异性检测HPA基因型的多态性；采用双系统的报告系统，极大提高检测灵敏度和特异性；高效高特异性的富集技术，实现了低起始量样本检测。

技术领域

本发明涉及一种微生物领域，具体为一种高效高特异性检测HPA基因型的方法和试剂盒。

背景技术

血小板(blood platelet，PLT)：哺乳动物血液中有形成分之一，是从骨髓成熟的巨核细胞胞质裂解脱落下来的具有生物活性的小块胞质。体积小，无细胞核，形状不规则，有质膜，没有细胞核，一般呈圆形。血小板具有特定的形态结构和生化组成，在正常血液中有较恒定的数量(如人的血小板数为1～3×105/mm3)，在止血、伤口愈合、炎症反应、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理过程中有重要作用。

血小板膜含有多种蛋白质，这些蛋白质连接有大量的碳水化合物支链而成为糖蛋白。血小板糖蛋白不仅对维持血小板型态和完整性非常重要，同时构成血小板的各种受体，使血小板发挥止血及相关功能。血小板糖蛋白基因发生变异时，可改变血小板糖蛋白结构和表达水平，进而影响血小板的黏附、聚集和血栓形成。

血小板抗原根据其分布情况可分为两大类型：一是与其他细胞或组织共有的抗原(ABH、HLA-I类等)；二是血小板本身特有的抗原(human platelet antigen，HPA)

1.2.1血小板相关抗原：包括人类白细胞抗原(HLA-I类)和红细胞ABO血型系统，其中约80％的免疫性PTR是由抗体不合引起。

1.2.2血小板特异性抗原：通过检出相应抗体而发现，截止目前已确定了HPA-1、2、3、4、5、15六个系统24个血小板抗原，每个抗原系统是由共显性双等位基因控制。其中约20％的免疫性PTR是由HPA抗体不合引起。

1.3与血小板抗原相关疾病的形成

血小板抗原根据其分布情况可分为两大类型：一是与其他细胞或组织共有的抗原(ABH、HLA-I类等)；二是血小板本身特有的同种抗原(human platelet antigen，HPA)，由血小板特有的抗原决定簇组成，HPA不匹配可引起血小板同种免疫反应，产生血小板同种抗体，一般由输血、妊娠或骨髓移植等免疫刺激而产生，导致同种免疫性血小板减少，诱发如输血后血小板减少性子癜(Post-Transfusion Purpura，PTP)、血小板输注无效(PlateletTransfusion Refractoriness，RTP)、自身免疫性血小板减少症(AutoimmuneThrombocytopenia，AITP)、新生儿同种异体免疫性血小板减少症(Neonatal AlloimmuneThrombocytopenia，NAITP)等疾病，同时在临床移植中还会引起移植排斥。

1.4血小板输注

血小板数低于正常值时会引起一系列病症：多发性瘀斑、粘膜出血、手术后大量出血、胃肠道大量出血、中枢神经系统内出血等，严重时可危及生命。重症再生障碍性贫血、急性白血病、癌症、血小板无力症、巨血小板综合征、血小板型血管性血友病等患者需要输注血小板才能延续生命。