[发明专利]一种外泌体的纯化方法在审
申请号: | 202110598146.0 | 申请日: | 2021-05-28 |
公开(公告)号: | CN113403251A | 公开(公告)日: | 2021-09-17 |
发明(设计)人: | 方杨武;王奕;李东升;于振亚 | 申请(专利权)人: | 微纳核酸生物医药(广东)有限公司 |
主分类号: | C12N5/00 | 分类号: | C12N5/00 |
代理公司: | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人: | 颜希文 |
地址: | 528031 广东省佛山市禅城*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 外泌体 纯化 方法 | ||
1.一种外泌体的纯化方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)将富含外泌体的细胞培养液于9000~11000g离心;
(2)将步骤(1)得到的上清液和碘帕醇溶液一起离心,得到外泌体粗提液,离心时,碘帕醇位于所述步骤(1)得到的上清液下部,离心力为100000~110000g;所述碘帕醇溶液的浓度为40~42%(w/v);步骤(1)得到的上清液和碘帕醇的体积比为500~600:1;
(3)将外泌体粗提液用缓冲溶液稀释4~6倍和外泌纯一起离心,外泌纯位于所述外泌体粗提液下部,离心力为100000~110000g;外泌体粗提液和外泌纯的体积比为2:1~1.2;所述外泌纯为25~30%(w/v)的碘帕醇溶液;
(4)分别收集步骤(3)离心分层后的产物。
2.根据权利要求1所述外泌体的纯化方法,其特征在于,所述步骤(3)中,缓冲溶液为PBS缓冲液。
3.根据权利要求1所述外泌体的纯化方法,其特征在于,所述步骤(1)中,离心的时间为25~35min。
4.根据权利要求1所述外泌体的纯化方法,其特征在于,所述步骤(2)中,离心的时间为65~75min。
5.根据权利要求1所述外泌体的纯化方法,其特征在于,所述步骤(3)中,离心的时间为65~75min。
6.一种用于外泌体的纯化方法的连续密度梯度介质,其特征在于,所述连续密度梯度介质的制备方法包括以下步骤:将外泌纯在100000g离心力下离心70min。
7.一种用于外泌体的纯化方法的连续密度梯度介质的制备方法,其特征在于,所述连续密度梯度介质的制备方法包括以下步骤:将外泌纯在100000g离心力下离心70min。
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