[发明专利]一种特异性识别PD-L1的纳米抗体及其应用

说明书

本发明涉及单克隆抗体技术领域，具体来说是一种特异性识别PD‑L1的纳米抗体及其应用，所述纳米抗体的互补决定区包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列CDR1、SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列CDR2和SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列CDR3。本发明所提供的一种特异性识别PD‑L1的纳米抗体，所述的纳米抗体对于PD‑L1具有良好的特异性，与其它蛋白的交叉反应性很低。本发明的纳米抗体可灵敏检测PD‑L1，重复性好，结果稳定；利用所述的纳米抗体，还可以可制备方便、快速且准确地检测PD‑L1的试剂盒。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体技术领域，具体来说是一种特异性识别PD-L1的纳米抗体及其应用。

背景技术

PD-1的临床转化研究主要是通过研发可以封闭PD-1或其配体的抗体进行。这些抗体有的已经应用于临床I期和Ⅱ期实验，有的还在动物模型中进行实验。据文献报道，这些抗体主要应用于：晚期癌症治疗，例如转移性黑色素瘤、肾癌等；慢性和长期病毒感染，比如脉络丛脑膜炎病毒，HIV感染等。另外，对于自身免疫病中PD-1及其配体的异常表达也有报道，激活PD-1途径以治疗自身免疫病也在讨论的范围内。目前已有的进入临床实验的封闭PD-1信号通路的抗体均是针对癌症治疗的，且大多数都是由药物公司研发。

另外，上个世纪90年代，在驼类体内发现天然缺失轻链，仅由重链组成的抗体。重链单域抗体可直接识别抗原，其蛋白质大小约为15-17kD，由于分子量小，因此又称为纳米抗体。重链抗体大约含130个氨基酸，具有较小的分子质量和较简单的结构，是可获得的较小的与抗原结合的单位。已有研究表明，纳米抗体相对于传统抗体具有更高的热稳定性，更好的折叠能力以及组织侵入性。文献表明，有些纳米抗体可以通过血脑屏障，这一特性对于药物输送意义重大。且其CDR3区比传统抗体长，更容易与凹陷结构结合，因此对于在封闭酶的活性方面很有优势。此外重链抗体还可以其他蛋白共同表达组成具有双特异性或者多种功能的融合蛋白。重链抗体与荧光蛋白结合极大地推动了分子成像技术的发展，进而推动了肿瘤的个性化治疗及药物研发领域的进步。近年来，国内外已构建了很多驼源天然单域重链抗体噬菌体库，也有半合成驼源单域重链抗体噬菌体库的建立，其展示的纳米抗体在癌症治疗、疫苗研发等领域都有重要应用。

发明内容

本发明的目的在于，通过使用合成法成功构建了噬菌体展示的纳米抗体文库，随后，以PD-L1胞外域蛋白为抗原筛选抗体，最终得到特异性结合PD-L1的抗体。纳米抗体本身的分子量较小，具有免疫原性小，高温稳定性等优点，使得针对PD-L1胞外域蛋白的纳米抗体相对已有的传统抗体具有较大的优势和更广泛的应用。

为了实现上述目的，在本发明的第一方面，提供一种特异性识别PD-L1的纳米抗体，所述纳米抗体的互补决定区包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列CDR1、SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列CDR2和SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列CDR3。

进一步的，所述纳米抗体的骨架区包括如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列FR1、SEQID NO.6所示的氨基酸序列FR2、SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列FR3和SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列FR4。

进一步的，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还包括一种多核苷酸，其编码上述纳米抗体。

进一步的，还包括一种表达载体，所述表达载体中包括上述多核苷酸。

优选的，所述表达载体优选为pET28a，上述多核苷酸可通过分子克隆技术克隆至pET28a中进行表达。

本发明还提供一种宿主细胞(为非繁殖细胞)，该宿主细胞中含有上述的表达载体或其基因组中整合有上述的多核苷酸。

在本发明的另一方面，提供一种产生纳米抗体的方法，包括：培养上述的宿主细胞，使之表达上述的纳米抗体。