[发明专利]一种免疫磁微粒的偶联方法、稀释液和应用

权利要求书

1.一种免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）活化：在缓冲体系a中利用交联剂对洁净的磁珠进行活化，得到活化后的磁珠，其中所述交联剂为EDC交联剂，所述磁珠为羧基磁珠；

（2）偶联：在缓冲体系b中向活化后的磁珠中加入抗体，混匀、孵育，得到抗体-磁珠偶联物；

（3）封闭：在所述步骤（2）得到的抗体-磁珠偶联物中加入封闭液进行封闭，得到抗体-磁珠偶联的免疫磁微粒终产物；

所述缓冲体系a的pH值为4～6，所述缓冲体系b的pH值为6.5～6.8；

所述缓冲体系a为MES缓冲液，所述缓冲体系b为Good’s缓冲液；

所述封闭液的组分包括pH7.0～9.0的0.01～0.5M Tris、50～300mM NaCl、0.01～10%BSA（w/v）、0.01～1% Triton X-100（v/v）、0.1%～10% PEG（v/v）、0.1%～5%力肽（w/v）、0.01～0.09%叠氮钠（w/v）。

2.根据权利要求1所述的免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，所述交联剂的浓度为10～100mg/ml，所述交联剂和所述磁珠的质量比为1：100～100：1，活化时间为10～60min。

3.根据权利要求2所述的免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，所述交联剂的浓度为10mg/ml，所述交联剂和所述磁珠的质量比为1：1，活化时间为30min。

4.根据权利要求1所述的免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，所述缓冲体系a的pH值为5，所述缓冲体系b的pH值为6.8；所述Good’s缓冲液选自MES、PIPES、MOPSO、MOPS、HEPES、HEPPSO或EPPS缓冲液中的一种。

5.根据权利要求1所述的免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，所述抗体与所述磁珠的质量比为1：50～1：200，孵育时间为3～24h。

6.根据权利要求5所述的免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，所述抗体与所述磁珠的质量比为1：50，孵育时间为6h。

7.根据权利要求1所述的免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，封闭的时间为1～24h。

8.根据权利要求1所述的免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，所述封闭液的组分包括pH为7.5的0.1M Tris、150mM NaCl、0.5% BSA（w/v）、0.5% Triton X-100（v/v）、0.1%～10%PEG（v/v）、0.1%～5%力肽（w/v）、0.05%叠氮钠（w/v），封闭的时间为1～24h。

9.根据权利要求1所述的免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，所述PEG包括PEG200-10000，所述PEG浓度为2%（v/v）；所述力肽的浓度为2%（w/v）。

10.根据权利要求1至9任一项所述的免疫磁微粒的偶联方法，其特征在于，所述抗体包括CA125抗体。

11.一种根据权利要求1至10任一项所述的偶联方法获得的免疫磁微粒。

12.一种根据权利要求1至10任一项所述的偶联方法获得的免疫磁微粒在制备试剂盒或试剂盒检测试剂中的应用。

13.根据权利要求12所述的应用，其中所述试剂盒或试剂盒检测试剂还包括用于稀释所述免疫磁微粒的稀释液，所述稀释液的组分包括：pH7.0～9.0的0.01～0.5M Tris、50～300mM NaCl、0.05～5% BSA（w/v）、0.01～10% PVP（w/v）、0.1～10%海藻糖（w/v）、0.01～1%Tween 20（v/v）、0.01～0.09%叠氮钠、0.01～0.1% ProClin300。

14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述稀释液的组分包括：pH为7.5的0.1MTris、200mM NaCl、1% BSA（w/v）、5% PVP（w/v）、2%海藻糖（w/v）、0.05% Tween 20（v/v）、0.05%叠氮钠、0.05% ProClin300。