[发明专利]一种同时测定毛发中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己的分析方法

权利要求书

1.一种同时测定毛发中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，依次配制标准品储备液、标准品工作溶液和内标溶液；

步骤二，将空白毛发样品和待测毛发样品分别依次用超纯水清洗、丙酮清洗，收集最后一次丙酮清洗液，吹干后用甲醇复溶用以排除外污染因素；毛发在室温下干燥；将干燥后的所述待测毛发样品剪成小段，精密称后置于研磨管中，加入研磨珠、所述内标溶液和甲醇，使用冷冻研磨仪磨碎；然后离心，得到的上清液经微孔滤膜过滤，得到待测样品溶液；

将干燥后的所述空白毛发样品剪成小段，精密称后分别置于若干研磨管中，分别加入所述标准品工作溶液适量得到不同质量浓度的系列空白毛发样品，加入研磨珠，使用冷冻研磨仪磨碎；然后离心，得到的上清液经微孔滤膜过滤，得到系列空白毛发样品溶液；

步骤三，将所述待测样品溶液和系列空白毛发样品溶液分别进样，LC-MS/MS分析，

其中，色谱条件为：Restek Allure PFP丙基柱，100mm×2.1mm，5μm；流动相A为含0.1％甲酸的20mmol/L乙酸铵缓冲溶液，流动相B为甲醇；流速为0.3～0.5mL/min，流动相A：B＝30～40：60～70等度恒流洗脱8～12min，柱温为室温；自动进样器保持在4℃；

质谱条件为：电喷雾离子器质谱的正离子模式检测，多离子模式监测，采用Analystsoftware 1.5(Waters)和MultiQuant 3.0.2工作站进行数据收集和分析；质谱仪离子喷雾电压为5500V，离子源温度550℃，气帘气为30psi，雾化气(GS1)、辅助气(GS2)为50psi。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准品储备液的配制过程为：分别精密称取钩吻素甲、钩吻素子及钩吻素己标准物质，分别采用甲醇溶解配制成质量浓度为1.0mg/mL标准品储备液，密封后储存于-20℃的冰箱中备用；所述标准品工作溶液的配制过程为：取所述标准品储备液适量，用甲醇逐步稀释得到浓度为10000、5000、1000、100和10ng/mL的标准品工作溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标溶液的配制过程为：精密吸取氯胺酮-d4标准溶液10μL，加入990μL甲醇稀释制成内标物质储备液；取所述内标物质储备液适量，用甲醇稀释得到浓度为10ng/mL的内标溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将干燥后的所述毛发样品剪成2-3mm小段，精密称取剪段后的所述毛发样品10mg置于2mL的研磨管中，加入适量研磨珠、50μL所述内标溶液和450μL甲醇，使用冷冻研磨仪磨碎。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷冻研磨仪的参数设置如下：速度，2500rpm；运行次数，15次；间隔时间为60s，并以18m/s的速度研磨。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心的条件为：以9700×g离心3min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件为：Restek Allure PFP丙基柱，100mm×2.1mm，5μm；流动相A为含0.1％甲酸的20mmol/L乙酸铵缓冲溶液，流动相B为甲醇；流速为0.3mL/min，流动相A：B＝30：70等度恒流洗脱8min，柱温为室温；自动进样器保持在4℃。