[发明专利]ELMO2过表达间充质干细胞的构建及其在骨折治疗中的应用有效
| 申请号： | 202110592656.7 | 申请日： | 2021-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN113215105B | 公开（公告）日： | 2022-11-29 |
| 发明（设计）人： | 沈慧勇;谢中瑜;余文辉;吴燕峰;王鹏;李进腾;郑冠;刘文杰 | 申请（专利权）人： | 中山大学附属第八医院（深圳福田） |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/12;C12N15/85;A61K35/28;A61K38/17;A61K48/00;A61P19/08 |
| 代理公司： | 深圳市创富知识产权代理有限公司 44367 | 代理人： | 叶灿才 |
| 地址： | 518033 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | elmo2 表达 间充质 干细胞 构建 及其 骨折 治疗 中的 应用 | ||
1.一种过表达ELMO2的间充质干细胞在制备治疗骨折的药物中的应用，其特征在于，所述过表达ELMO2的间充质干细胞的构建方法为：根据ELMO2的TSS上游序列设计特异的sgRNA，再通过sgRNA将融合了转录因子VP64、p65激活结构域和Rta的dCas9特异地导向ELMO2的TSS位点，通过转录因子的激活作用促进ELMO2在MSCs中转录，构建得到过表达ELMO2的MSCs，所述ELMO2的TSS上游序列的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1所示，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2所示；
所述过表达ELMO2的间充质干细胞的构建方法具体包括以下步骤：
S1、根据如SEQ ID NO: 1所示的ELMO2的TSS上游序列设计特异的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2所示；
S2、将dSp-VP64-p65-RTA质粒，sgRNA与opti-MEM培养基混合得到预混液1，所述dSp-VP64-p65-RTA质粒与sgRNA的用量比为5μg：25ng，所述sgRNA在预混液1中的浓度为25ng /150μL；
S3、将辅助转染试剂与opti-MEM培养基混合得到预混液2；
S4、将预混液1和预混液2混合后加入细胞培养基中，经室温孵育后将培养基加入培养MSCs细胞的孔板里，48小时后，向培养基中添加嘌呤霉素筛选能存活的MSCs，构建得到过表达ELMO2的MSCs。
2.根据权利要求1所述的一种过表达ELMO2的间充质干细胞在制备治疗骨折的药物中的应用，其特征在于，所述预混液1与预混液2的体积比为1:1。
3.根据权利要求1所述的一种过表达ELMO2的间充质干细胞在制备治疗骨折的药物中的应用，其特征在于，步骤S4中，室温孵育15min。
4.根据权利要求1所述的一种过表达ELMO2的间充质干细胞在制备治疗骨折的药物中的应用，其特征在于，所述辅助转染试剂与opti-MEM培养基的体积比为1: (25-35)。
5.根据权利要求1所述的一种过表达ELMO2的间充质干细胞在制备治疗骨折的药物中的应用，其特征在于，所述MSCs细胞的浓度为1×105个/孔。
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