[发明专利]一种采用三联PCR检测猪PRV、PRRSV、PCV2的试剂及方法

说明书

本发明公开了一种采用三联PCR检测猪PRV、PRRSV、PCV2的试剂及方法，包含能扩增PRV的gE基因、PRRSV的M基因和PCV2的ORF2基因的三对特异性引物，其中P1和P2引物扩增gE基因片段，扩增长度为178bp，P3和P4引物扩增M基因片段，扩增长度为363bp，P5和P6引物扩增ORF2基因片段，扩增长度为494bp；所述引物序列为如下核苷酸序列：P1：SEQ ID NO：1；P2：SEQ ID NO：2；P3：SEQ ID NO：3；P4：SEQ ID NO：4；P5：SEQ ID NO：5；P6：SEQ ID NO：6。本发明一种采用三联PCR检测猪PRV、PRRSV、PCV2的试剂及方法，具有快速、特异性强等优点，通过联合PCR技术可以快速、有效地鉴别PRV、PRRSV和PCV2三种混合病毒，与单一PCR检测相比，具有省时、省力的优点。

技术领域

本发明涉及检测试剂领域，具体涉及一种采用三联PCR检测猪PRV、PRRSV、PCV2的试剂及方法。

背景技术

猪PRV、PRRSV和PCV2均为引起猪繁殖障碍的三种重要的病毒性病原体，在种猪场常发生的各种疫病中，繁殖障碍性疾病是最令畜牧兽医工作者头疼的一类疾病，这类疾病包括猪伪狂犬病、猪乙型脑炎、猪繁殖与呼吸道综合征以及猪2型圆环病毒感染等。主要表现为感染后母猪发生流产、死胎、木乃伊胎，公猪也引起繁殖障碍，此外还能够引起仔猪大量死亡或发生混合感染和继发感染。不仅引起种猪发生严重的繁殖障碍，更重要的是引起各种年龄猪只大量死亡，并波及到商品猪场。严重影响了我国养猪业的健康发展。对本病的诊断目前主要是PCR和血清学诊断方法。但是血清学方法不如PCR方法敏感性高，PCR方法大多都是单一PCR检测，要检测这三种病毒的混合感染需要三个体系，操作相对比较繁琐。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有检测PRV、PRRSV、PCV2三种病毒混合感染的方法为分别进行单一PCR检测，操作相对比较繁琐，目的在于提供一种采用三联PCR检测猪PRV、PRRSV、PCV2的试剂及方法，可在同一体系中检测三种感染病毒的存在，能够大大的提高诊断效率。

本发明通过下述技术方案实现：

一种采用三联PCR检测猪PRV、PRRSV、PCV2的试剂，包含能扩增PRV的gE基因、PRRSV的M基因和PCV2的ORF2基因的三对特异性引物，其中P1和P2引物扩增gE基因片段，扩增长度为178bp，P3和P4引物扩增M基因片段，扩增长度为363bp，P5和P6引物扩增ORF2基因片段，扩增长度为494bp；所述引物序列为如下核苷酸序列：

P1：SEQ ID NO：1：5'-ATGGGCATCGGCGACTACCT-3'；

P2：SEQ ID NO：2：5'-CCACCGCCACAAAGAACACG-3'；

P3：SEQ ID NO：3：5'-CCGACTGCTAGGGCTTCT-3'；

P4：SEQ ID NO：4：5'-TATCTGCCACCCAACACG-3'；

P5：SEQ ID NO：5：5'-CACGGATGTTGTATTCCTGGT-3'；

P6：SEQ ID NO：6：5'-CCGCACCTTCGGATATACTATC-3'。

一种采用三联PCR检测猪PRV、PRRSV、PCV2的试剂，包括10×PCR缓冲液2μL，2×GC缓冲液(Mg²⁺5mmol/L)10μL，2.5mmol/L dNTP 4μL，25mmol/L Mg²⁺溶液1.5μL，20μmol/L P1、P2混合物0.4μL，20μmol/L P3、P4混合物1.2μL，20μmol/L P5、P6混合物0.6μL，Taq DNA聚合酶(5U/μL)0.4μL，ddH2O1.9μL。