[发明专利]TEX11基因致病性突变在制备检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体是TEX11基因致病性突变在制备检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒中的应用。本发明按照先将外周血DNA提取，然后进行PCR扩增目的基因，最后采用Sanger测序检测基因突变位点的方法，最终分别在4个家系中验证了TEX11基因致病性突变：家系1：NM_001003811:c.G2613T:p.W871C；家系2：NM_001003811:c.1426‑1CT；家系3：NM_001003811:c.1796+2TG；家系4：NM_001003811:c.857delA:p.K286R fs*5。其优点表现在：本发明为非梗阻性无精子症基因诊断、产前基因筛查及遗传咨询提供了一种有效的的途径。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，是TEX11基因致病性突变在制备检测非梗阻性无精子症诊断试剂盒中的应用。

背景技术

生育是一个复杂的过程，不能由单独的个体完成，而是取决于男女双方，只有在双方各种条件均适宜的情况下，才能顺利完成。据WHO统计，大约每七对夫妇中就有一对存在着各种程度的生育障碍，其中有近一半与男方因素有关，由此被称为男性不育。男性不育给个人、家庭造成了沉重的精神和经济负担，成为家庭和社会的不稳定因素之一。因此，男性不育已逐渐成为一个全球性的公共社会问题，是许多国家生殖健康服务的重要内容之一。

在所有导致男性不育病因中，无精子症是最为常见的病因之一，在成年男性中约占1％。无精子症是指患者三次正常排精后，精液中没有精子。它可分为梗阻性和非梗阻性无精子症。梗阻性无精子症【obstructive azoospermia(OA)】是由输精管道梗阻而引起精液中没有精子，非梗阻性无精子症【non-obstructive azoospermia(NOA)】是由于男性睾丸生精障碍而导致，后者的精子数量和形态都比较差，所有的睾丸精子活动能力都低或没有活动能力，其危害程度远大于OA。引起NOA的原因很多，包括遗传性疾病(如Klinefelter综合征)、先天性睾丸异常、睾丸本身病变(如睾丸外伤，炎症，扭转以及睾丸血管病变)、内分泌疾病(如垂体功能亢进或低下、垂体肿瘤、肾上腺功能亢进或低下和甲亢或甲低)、严重全身性疾病和营养不良，以及放射损伤及药物等。值得注意的是，相当数量的NOA临床原因不明，其早期诊断和治疗就显得更为困难。在我国，约有25％的男性不育是NOA，因此，NOA，尤其是临床原因不明的NOA，不仅是我国成年男性生殖健康面临的最主要威胁之一，也是男性不育治疗的一个严峻问题。

目前，NOA的初步诊断方法主要为病史询问、体格检查、精液参数、精浆生化、血性激素检测、B超以及染色体检测等。世界卫生组织在男性不育的诊断检查及处理手册指明：无精子症是指精子密度等于0，即使将精液离心后检查亦不能发现精子。临床上通常3次离心镜检精液仍未见到精子，同时，排除不射精和逆行射精后方可确诊为无精子症病人。常规的精子密度分析目前主要依靠精子密度判别(人工计数或利用计算机辅助系统分析，即CASA)，尚无其他有效的手段，但其自身存在一定的缺陷，如个体精液质量波动较大，尤其易受到禁欲天数、温度、采集精液方法等因素的影响，从而造成精子密度测量不准确；对相应疾病的早期诊断效果也远不能满足需要。而明确诊断常需进行睾丸穿刺活检，这给寻求生育帮助的人群带来极大的痛苦。尽管目前国内外研究者正努力探索新的NOA诊断生物标志物，并对现有评估手段进行有效的补充，但一直难以突破传统生物标志物发展和男性生殖实际应用中的瓶颈，即有创穿刺活检、精液质量分析结果波动、以及早期诊断困难等。此外，由于病因不明，缺乏有效的治疗手段，大多数NOA病人只能选择ICSI或AID等辅助生育手段，不仅无法满足心理上的要求，而且有可能出现后代的遗传缺陷。