[发明专利]一种用于发掘黄曲霉菌株产毒力指示分子的方法

权利要求书

1.一种用于发掘黄曲霉菌株产毒力指示分子的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)取黄曲霉强产毒力菌株，培养获得菌株培养物和胞外分泌蛋白质混合物；然后将菌株培养物细胞破碎，获得胞内蛋白质混合物；将上述胞外分泌蛋白质混合物和胞内蛋白质混合物合并，加入碳二亚胺偶联获得黄曲霉抗原，所述的黄曲霉强产毒力菌株的产毒力经NY/T 2311—2013标准方法鉴定结果不小于10μg/kg；

(2)将上述黄曲霉抗原免疫试验动物，获得纳米抗体库或单克隆抗体库；

(3)获得不同产毒力的黄曲霉菌株的蛋白质合并溶液，利用步骤(2)获得的抗体库中的抗体，检测不同产毒力的黄曲霉菌株的蛋白质，获得系列检测信号，所述的不同产毒力的黄曲霉菌株不少3株，其产毒力经NY/T 2311—2013标准方法鉴定结果呈现为高、中、低至少3个层次；

(4)找出检测信号与上述黄曲霉菌株产毒力呈现正相关的纳米抗体或单克隆抗体，即黄曲霉菌株产毒力指示分子抗体，与黄曲霉菌株产毒力指示分子抗体对应的蛋白质即发掘出的黄曲霉菌株产毒力指示分子。

2.根据权利要求1所述的所述的方法，其特征在于：步骤(1)的黄曲霉强产毒力菌株是通过常规方法从自然界分离、鉴定，或者通过人工改造获得。

3.根据权利要求1所述的所述的方法，其特征在于：所述的黄曲霉强产毒力菌株培养中采用的培养基为察氏培养基或者其他可供黄曲霉正常生长的营养物，培养时间不少于12h，培养的环境温度为15～35℃。

4.根据权利要求1所述的所述的方法，其特征在于：所述的碳二亚胺的用量为每1.0mL合并的胞外分泌蛋白质混合物和胞内蛋白质混合物中，加入碳二亚胺量为0.005～0.1g。

5.根据权利要求1所述的所述的方法，其特征在于：所述的偶联反应指在15～37℃反应2～6h，在4～10℃反应过夜。

6.根据权利要求1所述的所述的方法，其特征在于：所述的检测不同产毒力的黄曲霉菌株的蛋白质是指采用常规的WesternBlot技术流程，即将不同产毒力的黄曲霉菌株的蛋白质移至硝酸纤维素膜上，再利用抗体库中抗体，经直接方法或者间接方法检测，或者采用具有类似功效的其他技术流程。

7.根据权利要求6所述的所述的方法，其特征在于：所述直接方法是指将上述抗体库中抗体通过常规方法与信号材料偶联，再与上述移至硝酸纤维素膜上的相应蛋白质发生免疫结合反应。

8.根据权利要求6所述的所述的方法，其特征在于：所述间接方法是指将上述抗体库中抗体先与上述移至硝酸纤维素膜上的相应蛋白质发生免疫结合反应，然后再利用第二抗体与信号材料偶联物与上述结合到硝酸纤维素膜上的抗体发生免疫结合反应。

9.根据权利要求1所述的所述的方法，其特征在于：以产毒黄曲霉菌株的细胞裂解液为原料，获得与黄曲霉菌株产毒力指示分子抗体对应的蛋白质即黄曲霉菌株产毒力指示分子，具体可通过蛋白质电泳法或者免疫亲和纯化法获得上述黄曲霉菌株产毒力指示分子。