[发明专利]细胞分离和富集一体化装置及方法

说明书

本发明涉及生物样本处理领域，具体公开了一种细胞分离和富集一体化装置，包括：样本过滤杯；过滤杯密封盖板，盖设在进液口处，样本过滤嘴，与所述样本过滤杯可拆卸连接，所述样本过滤嘴的顶端与底端均开设有开口，且所述样本过滤嘴的顶端开口与所述出液口连通；微孔滤膜，位于所述出液口与所述样本过滤嘴的底端开口之间；过滤嘴密封器件，与所述样本过滤嘴的底端连接，用于封堵所述样本过滤嘴的底端开口。本发明的一体化装置集成有细胞俘获、释放和回收功能，能够一体化实现复杂液基样本中稀有细胞分离与富集，在保证细胞活性和保留生化异质性的同时，提高了稀有细胞悬液的回收纯度。

技术领域

本发明涉及生物样本处理领域，具体公开了一种细胞分离和富集一体化装置及方法。

背景技术

血行转移是癌症最重要的转移途径。循环肿瘤细胞(circulating tumor cell，CTC)作为血行转移的先驱，是指从原发肿瘤脱落进入人外周血循环系统的肿瘤细胞。近年来，CTC的研究逐渐成为一个热点，研究者围绕CTC开展了CTC分离、富集、检测及下游分析等一系列研究。

血液的组成成分复杂，每毫升血液中包含10⁷个白细胞，10¹⁰个红细胞，而仅有1-10个CTC。因此，从大量背景细胞中高活性、高纯度、高效率分离并富集CTC是进行CTC检测和分析的基本前提。目前，稀有细胞的富集包括基于物理性质的分离和基于生物亲和性的分离。近年来，逐渐有研究者将两种性质的富集方法组合，改善稀有细胞的分离效果。但是目前基于物理和生物亲和性两种性质分离稀有细胞的装置集成度低，由于将两种分离原理相结合，存在液体多次转移的问题，易造成细胞丢失以及细胞活性降低，阻碍后续对CTC开展单细胞水平的下游分析和个性化精准治疗。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种细胞分离和富集一体化装置及方法，旨在解决上述至少一个技术问题。

为实现上述目的，本发明提出了一种细胞分离和富集一体化装置，包括：

样本过滤杯，所述样本过滤杯的顶端开设有进液口，所述样本过滤杯的底端开设有出液口；

过滤杯密封盖板，盖设在所述进液口处；

样本过滤嘴，与所述样本过滤杯可拆卸连接，所述样本过滤嘴的顶端与底端均开设有开口，且所述样本过滤嘴的顶端开口与所述出液口连通；

微孔滤膜，位于所述出液口与所述样本过滤嘴的底端开口之间；

过滤嘴密封器件，与所述样本过滤嘴的底端连接，用于封堵所述样本过滤嘴的底端开口。

另外，本发明提出了使用上述所述的一体化装置进行细胞分离和富集的方法，包括以下步骤：

将血样自进液口倒入所述样本过滤杯内；

采用过滤嘴密封器件封堵所述样本过滤嘴的底端开口，并向所述样本过滤杯添加释放缓冲液，将过滤杯密封盖板盖设在所述进液口处，并对整个装置进行旋转和振荡，使微孔滤膜上俘获的细胞释放至释放缓冲液中；

打开过滤杯密封盖板，并向样本过滤杯中添加免疫磁珠缓冲液，再盖上过滤杯密封盖板进行孵育，孵育过程中进行旋转、振荡；

将磁铁放置于磁铁放置槽，将一体化装置倒置并静置，直至免疫磁珠和白细胞的混合物被吸附至过滤杯密封盖板上；

更换一张相同孔径且未经修饰的微孔滤膜，再次翻转一体化装置，依次打开过滤嘴密封器件和过滤杯密封盖板，对含有稀有细胞的上清液进行二次过滤。另外，本发明的上述细胞分离和富集一体化装置还可以具有如下附加的技术特征。

根据本发明的一个实施例，所述过滤杯密封盖板与所述样本过滤杯螺接或卡接；还包括第一密封垫圈，所述样本过滤杯的顶端开设有用于放置所述第一密封垫圈的第一凹槽。