[发明专利]一种全细胞催化制备4-羟基异亮氨酸的方法

权利要求书

1.一种利用全细胞催化法制备4-HIL的方法，其特征在于，所述全细胞是以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主、以pET28a为载体表达异亮氨酸双加氧酶，以异亮氨酸为底物构建全细胞催化体系进行转化反应，将转化液进行超滤、离子交换后，再经脱色、浓缩、干燥得到4-HIL产品；

包括以下步骤：

(1)对重组大肠杆菌进行发酵培养，收集得到菌体；

(2)将菌体细胞、底物、缓冲液混合，于28-32℃条件下，转化20-24h，得到转化液；转化体系中，菌体细胞的浓度是120-180g/L，异亮氨酸的浓度是80-100g/L、α-酮戊二酸的浓度是80-120g/L、Vc的浓度是8-12g/L、七水合硫酸亚铁0.3-1.0g/L；

(3)将转化液利用超滤膜进行超滤处理以除去蛋白与菌体，得到超滤膜清液；

(4)对清液进行离子交换处理，采用的离子交换柱是732阳离子交换树脂，并用1-2％的氢氧化钠溶液进行洗脱；洗脱液的折光≥0.1时开始收集，收集电导率≤1000us/cm的洗脱液；

(6)向洗脱液中添加12-15％的活性炭，于55-60℃脱色30min-60min，抽滤、浓缩，干燥得到4-HIL产品。

2.根据权利要求1所述的一种利用全细胞催化法制备4-HIL的方法，其特征在于，所述异亮氨酸双加氧酶来源于枯草芽孢杆菌。

3.根据权利要求1所述的一种利用全细胞催化法制备4-HIL的方法，其特征在于，步骤(1)中，称取异亮氨酸90g、α-酮戊二酸100.5g、Vc 10.6g、七水合硫酸亚铁0.45g，加自来水溶解，倒入5L发酵罐中，调节料液pH至7.0，加入离心后菌体用量150g，自来水补足至3L，加入泡敌0.5mL，转化条件：30℃，250rpm，1vvm通气量反应，反应24h。

4.根据权利要求1所述的一种利用全细胞催化法制备4-HIL的方法，其特征在于，步骤(4)中，向洗脱液中添加15％的活性炭，于60℃脱色30min，抽滤、浓缩，干燥得到产品。

5.根据权利要求1所述的一种利用全细胞催化法制备4-HIL的方法，其特征在于，步骤(1)中，称取异亮氨酸85g、α-酮戊二酸100g、Vc 9g、七水合硫酸亚铁0.4g，加自来水溶解，倒入5L发酵罐中，调节料液pH至7.0，加入离心后菌体用量130g，自来水补足至3L，加入泡敌0.5ml，转化条件：30℃，250rpm，1vvm通气量反应，反应20h。

6.根据权利要求1所述的一种利用全细胞催化法制备4-HIL的方法，其特征在于，步骤(1)中，称取异亮氨酸100g、α-酮戊二酸110g、Vc12 g、七水合硫酸亚铁0.8g，加自来水溶解，倒入5L发酵罐中，调节料液pH至7.0，加入离心后菌体用量180g，自来水补足至3L，加入泡敌0.5ml，转化条件：30℃，250rpm，1vvm通气量反应，反应24h。