[发明专利]一种提高双歧杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法有效

专利信息
申请号: 202110583375.5 申请日: 2021-05-27
公开(公告)号: CN113151115B 公开(公告)日: 2023-07-04
发明(设计)人: 崔树茂;毛丙永;钱志浩;唐鑫;赵建新 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12N1/20 分类号: C12N1/20;C12N1/38;C12N1/04;C12R1/01
代理公司: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 彭素琴
地址: 214000 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 提高 杆菌 存活率 储藏 稳定性 方法
【说明书】:

发明公开了一种提高双歧杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法,属于微生物工程发酵领域。为了解决发酵乳杆菌受环境因素的影响降低活性和抗逆性差的问题。本发明提供了一种提高双歧杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法,步骤为利用含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素中任意一种或任意多种的发酵培养基培养双歧杆菌。调节双歧杆菌细胞膜后双歧杆菌的冻干存活率在95%以上,37℃储藏2个月后存活率为65%以上。

技术领域

本发明涉及一种提高双歧杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法,属于微生物发酵工程领域。

背景技术

双歧杆菌(Bifidobacterium)是益生菌的一种,它具有丰富的益生功能。近年来在欧盟、美国、日本和中国等国家和地区的市场上,含有双歧杆菌的产品种类逐年增多。大量的科学实验已经证实经常性的摄入双歧杆菌及其制品能够保证肠道的健康。

要使双歧杆菌产品可以发挥理想的益生效果,必须要保证产品中活菌的数量足够,所以工业上通常使用冷冻干燥的方法制备双歧杆菌益生菌粉。为了提高双歧杆菌冻干存活率以及保证其储藏稳定性一般要添加合适的冻干保护剂,冻干保护剂的价格昂贵。然而通过复配优化出来的冻干保护剂往往存在着保护效果的菌株差异性,对不同的双歧杆菌冻干保护的效果不一样。并且相对于乳杆菌来说,双歧杆菌在冷冻干燥过程中受到的损伤更严重,即使有冻干保护剂的保护存活率往往仍不能达到理想水平。例如文献“王桃,纪瑞,刘海燕,等.长双歧杆菌DD98冻干保护剂优化及菌粉保存稳定性研究[J].工业微生物,2020,50(2):22-27.”中王桃等人使用海藻糖作为冻干保护剂对长双歧杆菌进行冻干,存活率最高可达到90.3%,然而在25℃储藏60天后存活率下降为15.65%。文献“田洪涛,张篪,贾英民,等.海藻糖在双歧杆菌冻干菌粉制备和保藏中生物保护作用的初探[J].河北农业大学学报,2000(2):62-65.”中使用海藻糖的复配保护剂冻干长双歧杆菌存活率最高仅45.09%。上述内容均表明现有的大多数复配优化出的冻干保护剂冻干保护效果达不到令人满意的效果。

发明内容

本发明的目的是为了在节约成本的前提下,提高双歧杆菌的冻干存活率和储存稳定性,解决了双歧杆菌受环境因素的影响降低活性和抗逆性差的问题。

本发明提供了一种提高双歧杆菌抗逆性的方法,所述方法是利用含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素中任意两种或任意多种的发酵培养基培养双歧杆菌。

在一种实施方式中,所述双歧杆菌为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、两歧双歧杆菌((Bifidobacterium bifidum)、青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentic)或短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。

在一种实施方式中,所述吐温80的浓度为0.1g/L~2.0g/L;所述胡萝卜素的浓度为0.1g/L~2.0g/L;所述褪黑素的浓度为0.1g/L~2.0g/L。

本发明还提供了一种提高双歧杆菌抗逆性的培养基,所述培养基是含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素中任意两种种或任意多种的发酵培养基。

在一种实施方式中,所述培养基还包括碳源和氮源。所述碳源包括葡萄糖、乳糖、蔗糖、阿拉伯糖、低聚糖中的一种或多种;所述氮源包括酵母浸粉FM528、酵母提取物、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、牛肉膏、牛肉浸粉中的一种或多种。

本发明还提供了一种制备双歧杆菌冻干粉的方法,所述方法的步骤如下:

(1)利用上述的培养基培养双歧杆菌;

(2)收集步骤(1)得到的双歧杆菌与冻干保护剂按照质量比为1:1混合,再进行冻干处理后获得双歧杆菌冻干粉。

在一种实施方式中,所述冻干保护剂的成分为:山梨糖醇、棉子糖、乳清蛋白、硫酸镁、谷胱甘肽和硫酸锰中的任意一种或多种。

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