[发明专利]一种用于HIV抗原、抗体定量联合检测的试剂盒及检测方法

说明书

本申请涉及HIV病毒检测的技术领域，具体公开了一种用于HIV抗原、抗体定量联合检测的试剂盒及检测方法。该试剂盒包括：由HIV‑1型抗原、HIV‑2型抗原和HIV‑1 p24抗体分别包被的磁性荧光编码微球的混匀液A；利用荧光素标记的、与包被磁性荧光编码微球的HIV‑1型抗原、HIV‑2型抗原、HIV‑1 p24抗体分别配对的HIV‑1型抗原、HIV‑2型抗原、HIV‑1 p24抗体的混匀液B；该检测方法为：利用上述试剂盒与待测样本反应，并用流式细胞仪进行检测，从而能够同时获得待测样本中HIV‑1/2型抗原以及HIV‑1 p24抗体的相对浓度。

技术领域

本申请涉及HIV病毒检测的技术领域，更具体地说，它涉及一种用于HIV抗原、抗体定量联合检测的试剂盒及检测方法。

背景技术

获得性免疫缺陷综合症是由人类免疫缺陷病毒(HIV病毒，即艾滋病病毒)感染所引起的一种免疫缺陷性疾病。HIV病毒感染的诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分。

HIV病毒感染的过程如下：首先，HIV病毒侵入人体后，其表面的糖蛋白gp120与人体内的细胞表面受体CD4以高亲和力结合，形成HIV-CD4结合体；然后，在细胞表面受体CD4的作用下，HIV-CD4结合体会吸附到宿主细胞上，同时，糖蛋白gp120与宿主细胞表面的辅助受体相互作用，使得HIV病毒与宿主细胞的细胞膜更接近；接着，HIV病毒表面的糖蛋白gp41发生一系列构象变化，且其N端的融合片段插入宿主细胞的细胞膜，导致HIV病毒的包膜与宿主细胞的细胞膜最终融合，HIV病毒的RNA进入宿主细胞，从而完成HIV病毒的感染。

HIV病毒感染人体后，经过诊断，首先，能够检测到的是HIV病毒的RNA：在HIV病毒感染人体后的10-14天内，RNA含量的变化趋势是先呈指数上升、随后下降并保持在持续稳定的水平上，即进入HIV无症状期。然后，能够检测到的是p24抗原：p24抗原的含量随RNA含量的变化而变化，在HIV病毒感染期便会出现，称为p24抗原早期。p24抗原被认为是HIV病毒复制的间接标志，但由于检测方法的灵敏度不够高，使得p24抗原的检出时间要比RNA晚。最后，能够检测到的是HIV抗体。从HIV病毒感染到能够检测出HIV抗体的这一时期，被称作“窗口期”。

在窗口期，通过检测RNA、p24抗原和CD4淋巴细胞的含量，能够确定HIV病毒的感染情况。CD4淋巴细胞的含量随着HIV病毒的感染而逐渐降低，当血液中CD4淋巴细胞的含量下降到200个/ml时，就会发生严重的免疫缺陷，患者被确诊为艾滋病。故HIV病毒的RNA、p24抗原、HIV抗体和CD4淋巴细胞的含量可用来确定HIV病毒的感染，并检测HIV病毒感染的病情发展。

在病毒分类中，HIV病毒属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。根据血清学反应和病毒核酸序列测定，全球流行的HIV病毒可分为2种类型：HIV-1型和HIV-2型。

检测HIV病毒感染的方法有100多种，总体来说可以分为病毒检测和抗体检测两大类。其中，HIV抗体通常在HIV病毒感染后3-8周能够被检测出来。抗体检测大多数应用双抗原夹心法，该方法具有很好的灵敏性和特异性。然而，在窗口期，HIV抗体不能被检出，但可以检测到的是HIV相关抗原或分离HIV病毒。因此，通过检测p24抗原来诊断HIV病毒感染有着很大的优势，可以作为辅助诊断HIV病毒感染的一种方法。

免疫学检测技术目前已发展到第四代，主要是HIV-1/2型抗体和p24抗原的混合筛查方法，提出同时检测HIV-1/2型抗体和p24抗原，降低血源筛查的残余危险度。申请公布号为CN105527426A的中国专利文献中，检测HIV抗体采用的是间接法原理，利用荧光编码微球作为载体包被抗原与待测样本反应，再与相对应的生物素化抗人二抗反应，最后与报告分子结合；而检测HIV抗原则采用的是双抗体夹心法原理，利用包被有p24单克隆抗体的荧光编码微球与待测样本反应，再与荧光素标记的p24单克隆抗体反应。可见，虽然提出了HIV-1/2型抗体和p24抗原的同时检测，但实质上还是将HIV-1/2型抗体和p24抗原分开检测的，并没有实现两者的同时检测。

发明内容