[发明专利]一种天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法

说明书

本发明一种天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，用超纯水对农产品粉碎后的粉末超声提取，离心后分离沉淀，得到沉淀和提取液，将沉淀同样处理得到的提取液合并后得到提取液A；将超纯水换为NaCl溶液、乙醇溶液和NaOH溶液，得到提取液B、C和D；调节各个提取液的pH至水、盐、醇和碱溶性硒蛋白的等电点，离心分离得到对应的硒蛋白；在这些硒蛋白中分别加入酸解体系进行湿法消解，后依次赶酸、冷却和定容，得到对应的蛋白硒检测液；将四种检测液用电感耦合等离子体发射光谱法进行检测，将每个发射光谱强度带入硒标准溶液得到的线性回归方程中，得到天然富硒农产品中水溶性蛋白硒、盐溶性蛋白硒、醇溶性蛋白硒和碱溶性蛋白硒的浓度。

技术领域

本发明涉及蛋白硒提取及检测技术领域，具体为一种天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法。

背景技术

硒具有清除人体内自由基、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、预防心肌梗塞和心脑血管疾病、预防癌变、提高机体免疫力等生物学功能，已被世界卫生组织和中华医学会定为继碘、锌之后的第三大微量营养保健元素。人体中的硒必须从体外摄取以满足自身健康需要，硒的缺乏会对机体造成不良影响。国际学术组织联合会建议成年男女每日膳食硒适宜需要量分别为40μg和30μg，中国营养学会推荐成人膳食的日摄入量为50～250μg，普遍接受的每日硒摄入量一般在50～200μg之间，上限为400μg。由于土壤中硒分布不均的问题，大多数地区的居民都处于缺硒状态，中国营养学会曾对我国13个省市进行调查，发现成人日平均硒摄入量为26～32μg，低于所推荐的日摄入量。保证硒在农产品及食品中的含量和质量安全，制定完善的富硒农产品和食品标准，对我国居民在一定的适宜范围摄入膳食硒，具有科学指导意义。

硒主要有无机硒和有机硒2种形态，不同化学形态硒对人体的吸收、生物效应、毒性及防癌的作用不同。无机硒主要以四价和六价形式存在，摄入过量会导致急性或慢性中毒，如硒酸盐或亚硒酸盐会导致生物体发生病变。有机硒在动、植物体内主要以硒蛋白的形式调控和实现生物学功能，在神经系统发育、免疫功能调节、疾病的预防与治疗等方面起着重要作用。硒蛋白主要是指硒以硒代半胱氨酸形式通过氨基酸脱水缩合作用结合到肽链上所形成的复合物。动物体内的硒主要来自于食物，膳食硒蛋白经消化水解为硒代甲硫氨酸和硒代半胱氨酸，容易被机体吸收。

天然富硒农产品中的有机硒如硒蛋白很难被有效提取，为准确检测其硒含量，要进行消解处理，使有机硒转变为易于检测的无机硒。消解方法有湿法消解、干法灰化消解及微波消解等。微波消解操作繁琐，用时较长，样品易损失。干法灰化消解会使食品中的硒以挥发性化合物的形式损失，导致硒含量检测误差较大，影响检测结果的可靠性。而湿法消解操作简单，成本低，重现性好，与干法灰化消解相比损失较少。因此如何采用湿法消解来进行硒含量的分析，进而解决挥发性硒化物的损失，是当前需要解决的问题。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明提供了一种天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，操作简便，提取及检测成本低，最大限度地降低了不同性质的物质相互干扰以及基质的影响，对天然富硒农产品中蛋白硒实现广谱提取及检测。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，包括以下步骤：

步骤1，将待提取的天然富硒农产品粉碎后，得到粉末，将粉末分为不少于四份后将其中一份按步骤1a处理，得到提取液A；

步骤1a，使用超纯水对粉末进行超声提取，得到混合体系a，再将混合体系a离心后分离沉淀，得到沉淀物a和提取液a，将沉淀物a用处理粉末的方式进行处理，得到提取液b，将提取液b与提取液a合并后得到提取液A；

将步骤1a中的超纯水分别替换为NaCl溶液、乙醇溶液和NaOH溶液，然后分别重复步骤1a，对应得到提取液B、提取液C和提取液D；