[发明专利]一种天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法

权利要求书

1.一种天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将待提取的天然富硒农产品粉碎后，得到粉末，将粉末分为不少于四份后将其中一份按步骤1a处理，得到提取液A；

步骤1a，使用超纯水对粉末进行超声提取，得到混合体系a，再将混合体系a离心后分离沉淀，得到沉淀物a和提取液a，将沉淀物a用处理粉末的方式进行处理，得到提取液b，将提取液b与提取液a合并后得到提取液A；

将步骤1a中的超纯水分别替换为NaCl溶液、乙醇溶液和NaOH溶液，然后分别重复步骤1a，对应得到提取液B、提取液C和提取液D；

步骤2，调节提取液A的pH至水溶性硒蛋白的等电点，之后离心分离得到水溶性硒蛋白；调节提取液B的pH至盐溶性硒蛋白的等电点，之后离心分离得到盐溶性硒蛋白；调节提取液C的pH至醇溶性硒蛋白的等电点，之后离心分离得到醇溶性硒蛋白；调节提取液D的pH至碱溶性硒蛋白的等电点，之后离心分离得到碱溶性硒蛋白；

步骤3，在水溶性硒蛋白、盐溶性硒蛋白、醇溶性硒蛋白和碱溶性硒蛋白中分别加入酸解体系进行湿法消解，之后依次赶酸、冷却和定容，分别得到水溶性蛋白硒检测液、盐溶性蛋白硒检测液、醇溶性蛋白硒检测液、碱溶性蛋白硒检测液；

步骤4，先将步骤3所述的四种检测液分别采用电感耦合等离子体发射光谱法进行检测，得到不同的发射光谱强度，将每个发射光谱强度带入硒标准溶液在电感耦合等离子体发射光谱法下得到的线性回归方程中，得到天然富硒农产品中水溶性蛋白硒、盐溶性蛋白硒、醇溶性蛋白硒和碱溶性蛋白硒的浓度。

2.根据权利要求1所述的天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，步骤1将所述的天然富硒农产品粉碎后过100目筛，得到粉末。

3.根据权利要求1所述的天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，步骤1中所述的超纯水与粉末的比例为5mL：0.5g；NaCl溶液中NaCl与粉末的比例为0.25mmol：0.5g；乙醇溶液中乙醇与粉末的比例为3.75mL：0.5g；NaOH溶液中NaOH与粉末的比例为0.5mmol：0.5g。

4.根据权利要求1所述的天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，步骤1a中所述的超声提取在30～40℃下进行40～60min。

5.根据权利要求1所述的天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，步骤1a中所述的混合体系a在0～4℃下离心。

6.根据权利要求1所述的天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，步骤2使用0.1mol/L的盐酸调节提取液A、提取液B、提取液C和提取液D的pH。

7.根据权利要求1所述的天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，步骤2中所述的离心均在0～4℃下进行。

8.根据权利要求1所述的天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，步骤3在水溶性硒蛋白、盐溶性硒蛋白、醇溶性硒蛋白和碱溶性硒蛋白中分别均加入超纯水、硝酸和过氧化氢进行加热，超纯水、硝酸、过氧化氢和步骤1a中粉末的比例为(10～20)mL：(3～5)mL：(1～3)mL：0.5g，再进行赶酸。

9.根据权利要求8所述的天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，赶酸后所得消化液的体积与超纯水的体积之比为(1～2)：(10～20)。

10.根据权利要求1所述的天然富硒农产品中蛋白硒的检测方法，其特征在于，步骤4采用电感耦合等离子体发射光谱法进行检测时，工作参数如下：

高频功率为1100～1200w，泵速为40～60rpm，光室温度为30～40℃，重复4～8次。