[发明专利]一种膜蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种膜蛋白的纯化方法，其特征在于，所述方法由以下步骤组成：

步骤1、诱导目的膜蛋白在宿主细胞中表达；

步骤2、破碎宿主细胞，490 g～1000 g低速离心后取上清，将上清于30000 g高速离心1h后取沉淀；

步骤3、用重悬缓冲液重悬步骤2所得沉淀，然后加入去垢剂，震荡溶解后离心，取上清；

步骤4、将步骤3所得上清采用亲和层析纯化，使用包含十二烷基-β-D-麦芽糖苷、咪唑和甘油的洗脱缓冲液进行洗脱，收集洗脱液，超滤离心后即得目的膜蛋白；

步骤1中，所述宿主细胞为原核细胞和/或真核细胞；

步骤2中，当宿主细胞为原核细胞时，于4 ℃，490 g低速离心15 min后取上清；当宿主细胞为真核细胞时，于4 ℃，1000 g低速离心15 min后取上清；

步骤3中，所述去垢剂选自：体积比1：0.1的十二烷基-β-D-麦芽糖苷和胆固醇半琥珀酸三盐；或体积比1：0.2的1-十八烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-（1′rac甘油）和胆固醇半琥珀酸三盐；或体积比1：0.2的正十二烷基磷酸胆碱和胆固醇半琥珀酸三盐；

步骤1中，所述目的膜蛋白选自：内皮素受体B蛋白、鼠疫耶尔森菌毒力蛋白、B淋巴细胞抗原中的任意一种。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤3中，所述重悬缓冲液为BufferA，包括：Tris缓冲液，无机盐，甘油和蛋白酶抑制剂。

3.根据权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述BufferA中包括：20～50 mMTris, pH 7.0-7.5，50～200 mM NaCl，体积分数1～10% 甘油和蛋白酶抑制剂。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤4中，所述亲和层析纯化的步骤具体为：使用包含Tris缓冲液、无机盐、十二烷基-β-D-麦芽糖苷和甘油的Buffer B平衡层析柱，然后向层析柱中加入步骤3所得上清，依次用包含Tris缓冲液、无机盐、十二烷基-β-D-麦芽糖苷、甘油和20～500 mM 咪唑的洗脱缓冲液除杂洗脱。

5.根据权利要求4所述的纯化方法，其特征在于，所述Buffer B中包括：20～50 mMTris, pH 7.0-7.5，50～200 mM NaCl，0.01～0.1% 十二烷基-β-D-麦芽糖苷和1～10% 甘油。