[发明专利]组合因子诱导降解型内皮细胞，治疗肝纤维化疾病的方法

说明书

本发明公开了组合因子诱导降解型内皮细胞，治疗肝纤维化疾病的方法，具体地，本发明公开了一种筛选因子降解细胞外基质能力的方法，所述方法包括1)将待测细胞接种于胶原表面，所述胶原结合荧光分子，2)将步骤1)中的细胞进行培养；3)用待测因子对细胞进行处理；4)将步骤3)中培养液的上清液进行荧光检测，所述检测的激发光为546nm，发射光为575nm，检测所得到的荧光值表征细胞的降解能力。根据该方法，可以筛选出具有高降解能力的细胞。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及化学因子刺激内皮细胞及治疗肝纤维化疾病，具体涉及一种筛选细胞降解能力的方法及治疗肝纤维化疾病的药物。

背景技术

慢性炎症往往会导致纤维化，涉及各个器官或组织，包括皮肤，肾，肝，肺等。在纤维化发展中，不同的细胞类型都能合成1型胶原，包括肌成纤维细胞，巨噬细胞等，细胞的过度分泌导致了I型胶原的沉积。

纤维化是细胞外基质蛋白的过度积累，伴随着炎症，大多数发生在慢性疾病中。过度累积的细胞外基质的降解，主要是金属基质蛋白酶所介导的。随着肝纤维化的程度越来越严重，星形细胞的MMP13基因逐渐低表达，MMP3基因先升高后降低，炎性巨噬细胞，kuffer细胞，激活的星形细胞的MMP9，MMP12基因高表达。成肌纤维细胞也成为了合成细胞外基质的主要细胞。

目前对于纤维化疾病的治疗手段仍需改进。

发明内容

本发明首次提出了筛选细胞降解细胞外基质能力的方法，根据该方法，可以筛选出具有高降解能力的细胞，这些细胞在体外甚至在体内降解细胞外基质，从而逆转肝纤维化疾病，发明人首次将这种内皮细胞疗法(即筛选出的具有降解能力的细胞用于疾病治疗)用于治疗肝纤维化与相关疾病。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种筛选因子降解细胞外基质能力的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：1)将待测细胞接种于胶原表面，所述胶原结合荧光分子，2)将步骤1)中的细胞进行培养；3)用待测因子对细胞进行处理；4)将步骤3)中处理后培养液的上清液进行荧光检测，所述检测的激发光为546nm，发射光为575nm，检测所得到的荧光值表征细胞的降解能力。本发明首次提出了筛选细胞降解细胞外基质能力的方法，根据该方法，可以筛选出具有高降解能力的待测因子(可以是因子组合，也可以是单独的因子)，这些待测因子在体外甚至在体内降解细胞外基质，从而逆转肝纤维化疾病。需要说明的是，这里的接种等操作，如无特殊说明，均可采用常规的技术手段。

根据本发明的实施例，上述方法进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述荧光分子选自5(6)-TAMRA SE、FITC、CY3和CY7等。需要说明是是，荧光分子没有特别要求，可以根据实际需要选择需要的荧光分子。

根据本发明的实施例，所述培养是37℃的条件下暗培养两天进行的。需要说明的是，这里的培养物特别要求，可根据不同细胞的培养条件进行调整。

根据本发明的实施例，所述荧光检测是通过酶标仪检测的。

根据本发明的实施例，所述荧光值大于纯培养基与胶原材料孵育后上清的荧光值，代表细胞有降解细胞外基质能力。

根据本发明的实施例，所述待测细胞选自内皮细胞、免疫细胞和星形细胞的至少一种。需要说明的是，待测细胞无特别限制，发明人可根据需要选择不同的细胞。发明人采用了肝血窦内皮细胞，人脐静脉内皮细胞等细胞进行了相应的测试。

在本发明的另一方面，本发明还提出了药物组合物在制备用于治疗纤维化疾病、炎症、硬化性疾病或癌症药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物组合物包括PMA因子。发明人发现，PMA因子可以刺激肝血窦内皮细胞和人脐静脉内皮细胞等细胞，使其具有极强的降解细胞外基质的能力，极大减缓、改善了肝、肺、肾等器官炎症、纤维化、硬化和癌变的进程。

根据本发明的实施例，所述用途进一步包括如下技术特征至少之一：