[发明专利]一种韭菜迟眼蕈蚊细胞色素P450酶系基因沉默的方法及应用

说明书

本发明提供了一种韭菜迟眼蕈蚊细胞色素P450酶系基因沉默的方法及应用，属于分子生物学技术领域。本发明运用RNA干扰技术实现了对韭菜迟眼蕈蚊P450酶系基因CYP9J35‑like和/或CYP6FV2‑like和/或CYP3A56‑like的沉默，该方法准确可靠、操作简单、沉默效率高，为韭菜迟眼蕈蚊抗药性机制研究和抗性治理提供了研究基础。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种韭菜迟眼蕈蚊细胞色素P450酶系基因沉默的方法及应用。

背景技术

韭菜迟眼蕈蚊，其幼虫俗称韭蛆，是葱蒜等百合科蔬菜的重要害虫，尤其喜食韭菜。韭菜迟眼蕈蚊防治措施不当极易造成韭菜减产或农药残留超标。随着全球气候变暖和设施农业的迅速发展，韭蛆的为害愈加严重，已严重制约了韭菜种植业的发展。

目前，韭菜迟眼蕈蚊的防治措施主要为化学防治，随水灌施毒死蜱、辛硫磷、高效氯氟氰菊酯、噻虫嗪等化学药剂。随着化学药剂的长期使用，韭菜迟眼蕈蚊的抗药性不断提高。

细胞色素P450酶系，又称多功能氧化酶，广泛存在于细菌、真菌、植物和动物等生命体中，参与内源物质(如甾类化合物)和外源物质(如药物)的代谢，是药物代谢过程中的关键酶。昆虫细胞色素P450酶系与昆虫抗药性直接相关。抗性昆虫体内的P450酶系在质量或数量上增强，加快了杀虫剂的代谢和降解效率，使杀虫剂不能作用于其分子靶标，表现为抗药性增强。P450酶系的这种代谢解毒作用是P450介导抗性的化学本质。将细胞色素P450酶系基因进行沉默处理，是研究P450酶系与昆虫抗药性关系的重要手段。目前，缺少一种快速高效的针对韭菜迟眼蕈蚊的细胞色素P450酶系基因沉默的方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种韭菜迟眼蕈蚊细胞色素P450酶系基因沉默的方法及应用。本发明提供的方法沉默效率高，可快速高效地在整个韭菜迟眼蕈蚊虫体中沉默目的基因。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种韭菜迟眼蕈蚊细胞色素P450酶系基因沉默的方法，将细胞色素P450酶系基因的dsRNA与人工饲料混合后喂养韭菜迟眼蕈蚊。

优选的，所述韭菜迟眼蕈蚊为幼虫，所述幼虫的龄期为1～4龄。

优选的，所述细胞色素P450酶系基因的dsRNA由细胞色素P450酶系基因的cDNA体外转录得到。

优选的，所述dsRNA与人工饲料的混合比例为(10～100)μg：1g。

优选的，所述喂养的时间为6～72h。

优选的，所述细胞色素P450酶系基因包括CYP9J35-like、CYP6FV2-like和CYP3A56-like中的一种或多种；所述CYP9J35-like的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CYP6FV2-like的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述CYP3A56-like的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

优选的，合成所述细胞色素P450酶系基因的cDNA的引物为：

当所述细胞色素P450酶系基因为CYP9J35-like时，所述CYP9J35-like的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述CYP9J35-like的反向引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示；

当所述细胞色素P450酶系基因为CYP6FV2-like时，所述CYP6FV2-like的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述CYP6FV2-like的反向引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示；