[发明专利]生物样品中小分子物质检测的前处理试剂

说明书

本发明涉及分析检测技术领域，尤其涉及生物样品中小分子物质检测的前处理试剂。本发明提供的试剂中，包括磁珠悬液、活化液和洗脱液。以该试剂对生物样品中待测物的提取效率高且提取回收率高，所需样本量少，能够高效、准确富集生物样品中待测物。相比于免疫生物磁珠试剂盒，开封后的有效期长，更稳定。并且，配套使用的仪器成本低，更有利于前处理流程的自动化。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，尤其涉及生物样品中小分子物质检测的 前处理试剂。

背景技术

生物样品通常是指植物的花、叶、茎、根、种子等，动物(包括人)的体 液(如尿、血、唾液、胆汁、胃液、淋巴液及生物体的其他分泌液等)、毛发、 肌肉和一些组织器官(如胸腺、胰腺、肝、肺、脑、胃、肾等)以及各种微生 物。由于生物样品的组成复杂，易对后续分析检测产生干扰，因此需要在分 析检测前进行样品前处理。

生物样品前处理，也称为样品制备、样品净化、样品提取，是生物分析 过程中的重要组成部分。对于临床检验用途的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS) 方法而言，样品分析检测之前对生物样品进行处理是十分必要的。样品前处 理的主要目的是从样品基质中将一个或多个目标分析物与其他组分分离。生 物样品前处理是LC-MS/MS方法开发和优化极为关键的一环，因为样品前处理 是高通量检测的制约瓶颈以及分析误差的主要来源。LC-MS/MS方法的失败常 常是由于样品前处理不当，导致目标分析物信号被抑制或者被生物基质中的 共存物干扰。

生物样品具有以下特点：①生物样品基质组成十分复杂，样品中既含有 大分子的蛋白质、核酸，也含有小分子的脂肪、糖、尿酸、尿素等组分，还 有钠盐等盐类，都可能对分析检测产生干扰；②生物样本中部分目标分析物 的浓度太低，如不进行必要的富集浓缩，仪器灵敏度可能无法达到；③生物 样品与LC-MS/MS分析系统不兼容，如不进行前处理将损害分析系统，造成色 谱柱堵塞、离子源污染、产生基质效应等不良后果。因此生物样品前处理的 目的在于：①净化样品，去除干扰成分(蛋白、磷脂、盐等)；②减少基质 效应，提高灵敏度，浓缩样品、提高质谱检测信号；③保护进样系统和色谱 柱；④简化分析过程，提高检测通量。总之，进行有效的样品前处理是开展 灵敏、准确、高通量LC-MS/MS分析的前提。

目前，生物样品进行LC-MS/MS检测前的前处理方法主要包括：

1、蛋白沉淀法(PPT)：PPT是应用最早、耗时最少、已被广泛应用于 生物分析的样品前处理方法，具有简单、快速、经济的特点，是常用甚至首 选的样品前处理方法。血样在LC-MS/MS分析测定之前，必须首先进行去蛋白 处理。通过加入蛋白沉淀剂，使蛋白质变性，然后再混合、离心，形成蛋白 沉淀和上清液，直接进样或稀释后进样检测。常见的蛋白沉淀剂有：①与水 混溶的有机溶剂，如乙腈、甲醇、乙醇、丙酮等，2-3倍体积于样品混合，使 蛋白质分子内和分子间氢键改变而凝聚，经离心去除；②中性盐，饱和硫酸 铵、硫酸钠等，使蛋白脱水而沉淀；③强酸：如10％三氯乙酸、6％高氯酸等， 使pH低于蛋白等电点，形成不溶性盐而沉淀；④锌盐、铜盐、硫酸锌等，金 属盐离子与蛋白羧基形成不溶性盐而沉淀；⑤酶、枯草菌溶素等，测定一些 酸不稳定及蛋白结合牢固的物质。该方法在处理大量的样品时比较耗时，效 率不高；PPT处理的样品净化程度低，如不进行适当的色谱分离，会引起很强 的基质效应；处理过程中样品浓度被稀释，不适合待测物含量较少的样品前 处理；处理过程中需要使用到高速离心机，成本高并且不利于整个流程的自 动化。