[发明专利]一种扁平云假丝酵母及其分离培养方法和应用

权利要求书

1.一种低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母，其特征在于，所述低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母命名为扁平云假丝酵母(Candida humilis)YCT03CH菌株，保藏单位为中国典型培养物保藏中心(武汉大学)，保藏时间为2021年5月17日，保藏编号为CCTCC M 2021545，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号。

2.根据权利要求1所述的低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母，其特征在于，所述低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母是从清香型白酒发酵酒醅中分离筛选得到的。

3.一种低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母的分离培养方法，其特征在于，所述分离培养方法包括如下步骤：

(1)分别称取10g不同发酵酒醅于90mLYPD培养液中进行震荡富集培养；

(2)将步骤(1)富集培养后的上清液依次稀释至10^-5浓度；

(3)将步骤(2)制备得到的10^-3、10^-4、10^-5稀释菌液中分别吸取0.1mL涂布于WL固体培养基上进行培养，获得菌落；

(4)挑取步骤(3)中形态规则的菌落在孟加拉红固体培养基上进行分离纯化，获得单个纯种菌落，并采用26SrRNA同源性比较分析法进行菌种分类鉴定；

(5)将酵母纯菌株活化后，调整菌液浓度为1×10⁸cfu/mL，取1mL菌液于100mL高粱糖化液中，28℃培养箱静置发酵7d；

(6)采用HS–SPME–GC–MS技术对发酵液进行代谢产物分析。

4.根据权利要求3所述的低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述YPD培养液按质量百分比计包括如下组分：葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母浸粉1％,其余为无菌水。

5.根据权利要求3或4所述的低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(3)中所述WL固体培养基按g/L计包括如下组分：酵母浸粉5.0，酸水解酪蛋白5.0，葡萄糖50.0，磷酸二氢钾0.55，氯化钾0.425，氯化钙0.125，硫酸镁0.125，氯化铁0.0025，硫酸锰0.0025，溴甲酚绿0.022，琼脂17.0，其余为无菌水。

6.根据权利要求3或4所述的低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(4)中所述孟加拉红固体培养基按g/L计包括如下组分：蛋白胨5.0，葡萄糖10.0，磷酸二氢钾1.0，硫酸镁0.5，孟加拉红0.0333，氯霉素0.1，琼脂20.0，其余为无菌水。

7.根据权利要求3或4所述的低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(1)中是将适量酒醅放入YPD培养液中进行富集培养；富集培养的温度为28-30℃；摇床震荡转数为150-250r/min；富集培养时间为4-8h。

8.根据权利要求3或4所述的低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(4)中所述分离纯化的方法为：挑取步骤(3)中形态规则的菌落在孟加拉红固体培养基上划线培养，进行5-10次重复的操作达到分离纯化的目的。

9.根据权利要求3或4所述的低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(4)中所述菌株的分离筛选是采用26S rDNA的D1/D2区片段序列同源性分析法进行分类鉴定；筛选得到的低产正丙醇、高产四甲基吡嗪的酵母保藏于WL固体斜面培养基中备用。