[发明专利]一种共表达NFAT和人DNAM-1蛋白的重组质粒、重组细胞及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种共表达NFAT和人DNAM-1蛋白的重组质粒的构建方法，包括以下步骤：

（1）将NFAT-reverse的编码基因序列插入到载体PB-713B-1的SpeI和BstBI酶切位点之间，进行无内毒素质粒的小提制备，得PB-NFAT-Luc-713质粒；所述NFAT-reverse的编码基因序列如SEQ ID NO.1所示；

（2）对人DNAM-1的基因序列进行密码子优化后，插入到所述PB-NFAT-Luc-713质粒的Bsu36I和NdeI酶切位点之间，进行无内毒素质粒的大提制备，得到重组质粒PB-NFAT-Luc-CD226；所述密码子优化后的人DNAM-1的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述构建方法构建得到的重组质粒PB-NFAT-Luc-CD226。

3.一种包含权利要求2所述重组质粒PB-NFAT-Luc-CD226的重组细胞Jurkat-NFAT-Luc-CD226。

4.权利要求3所述重组细胞Jurkat-NFAT-Luc-CD226在非疾病诊断和治疗目的的检测和/或筛选抗人DNAM-1抗体中的应用。

5.一种非疾病诊断和治疗目的的检测和/或筛选抗人DNAM-1抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求3所述重组细胞Jurkat-NFAT-Luc-CD226和抗人DNAM-1抗体混合孵育4h，收集细胞悬液，离心去上清，再与ONE-Lite底物与缓冲液的1：1混合液混合，酶标仪上测定荧光信号，根据荧光信号的强度检测和/或筛选抗人DNAM-1抗体。

6.利用权利要求5所述方法筛选得到的抗人DNAM-1抗体，其特征在于，所述抗人DNAM-1抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示。