[发明专利]一种组织中游离血红素的检测试剂及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及检测试剂技术领域，尤其涉及一种组织中游离血红素的检测试剂及其制备方法和应用。所述检测试剂由3,3',5,5'‑四甲基联苯胺，二甲基亚砜，过氧化氢，4‑甲氧基喹啉，聚乙二醇400，羧甲基纤维素，二丁基羟基甲苯、缓冲液和水制成，所述缓冲液为浓度20mM的柠檬酸钠缓冲液，其余组分质量百分比如下：3,3',5,5'‑四甲基联苯胺：0.005％‑0.015％；二甲基亚砜：1％‑10％；过氧化氢：0.015％‑0.025％；4‑甲氧基喹啉：0.012％‑0.024％；聚乙二醇400：5％‑15％；羧甲基纤维素：0.25％‑0.5％；二丁基羟基甲苯：0.01％‑0.02％；余量为水。本发明制备的检测试剂稳定性好，准确度高，灵敏度也可达到0.625ug/L。

技术领域

本发明涉及检测试剂技术领域，尤其涉及一种组织中游离血红素的检测试剂及其制备方法和应用。

背景技术

癌症是由各种遗传突变的积累引起的。大多数癌细胞的共同特征是抑制线粒体有氧呼吸和增强的糖酵解ATP合成，以支持异常的细胞增殖和转移。因此，癌细胞需要并利用大量的葡萄糖，并通过加速的糖酵解产生过量的乳酸，从而导致乳酸性酸中毒。HIF-1(缺氧诱导因子1)由于肿瘤组织内癌细胞中的低氧浓度而被激活。HIF-1诱导丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK-1)，从而使丙酮酸脱氢酶 (PDH)失活。PDH是将丙酮酸转化为乙酰CoA的关键参与者，乙酰CoA连接了糖酵解途径和TCA循环。因此，HIF-1调节PDK-1，并充当糖酵解和TCA循环的调节剂。此外，HIF-1诱导了葡萄糖转运蛋白1和糖酵解酶，因此导致乳酸形成增加。因此，在缺氧条件下，HIF-1将代谢从氧化磷酸化转变为糖酵解，从而在缺氧条件下促进Warburg效应。5-氨基乙酰丙酸(ALA)是卟啉合成途径中导致血红素形成的前体。血红素合成中的限速酶是线粒体酶ALA合酶。ALA在细胞质和线粒体之间通过多种酶促反应代谢为原卟啉IX(PpIX)，并最终通过铁螯合酶合成铁血红素(原血红素)，该酶将铁离子与卟啉配位。血红素在几乎所有与氧代谢有关的过程中都起着至关重要的作用。血红素在血红蛋白，肌红蛋白和其他转运或储存氧气的球蛋白，线粒体呼吸链复合体，细胞色素P450和其他使用氧气进行生物合成和降解反应的加氧酶以及其他使用或使氧气解毒的酶中充当辅基作为过氧化物酶和过氧化氢酶。

而血红素的合成是需要氧作为底物的，肿瘤细胞发生之后，造成局部低氧环境，导致细胞合成血红素成为降低，进而引起原血红素在肿瘤细胞中大量积累，所以原血红素的含量成为了判断肿瘤发生的重要标志物。在肿瘤病变部位，随着部分肿瘤细胞的脱落，也就造成了组织渗出液中存在大量原血红素，所以原血红素含量就成为肿瘤早期筛查的重要指标。

由于原血红素具有过氧化物酶的性质，所以它可以催化过氧化物和TMB反应，形成蓝色物质联苯胺蓝，目前的市面上存在的原血红素检测试剂是由A液和B液组成，使用之前要先混匀，且灵敏度较差。

发明内容

有鉴于上述技术问题，本发明提供了一种组织中游离血红素的检测试剂及其制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种组织中游离血红素的检测试剂，所述检测试剂由3,3',5,5'-四甲基联苯胺二甲基亚砜，过氧化氢，4-甲氧基喹啉，聚乙二醇400，羧甲基纤维素，二丁基羟基甲苯、缓冲液和水制成，所述缓冲液为浓度20mM的柠檬酸钠缓冲液，其余组分质量百分比如下：

3,3',5,5'-四甲基联苯胺：0.005％-0.015％；

二甲基亚砜：1％-10％；

过氧化氢：0.015％-0.025％；

4-甲氧基喹啉：0.012％-0.024％；

聚乙二醇400：5％-15％；

羧甲基纤维素：0.25％-0.5％；

二丁基羟基甲苯：0.01％-0.02％；