[发明专利]一种全禽源H5N2亚型禽流感重组毒株、疫苗及其应用

说明书

本发明公开了一种全禽源H5N2亚型禽流感重组毒株、疫苗制备方法、疫苗组合物和应用。所述重组毒株由高致病性H5N6亚型禽流感流行毒株改造后的HA基因与H5N2亚型禽流感D7株的七个内部基因PB2、PB1、PA、NP、NA、M和NS构成；所述改造后的HA基因序列如SEQ ID NO：9所示；所述D7株的七个内部基因PB2、PB1、PA、NP、NA、M和NS的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～3、5～8所示。所述重组病毒是以D7系统为骨架拯救出的重组禽流感病毒，为无致病力毒株，且能保持原来的免疫原性，可在鸡胚培养过程中保持较高的病毒滴度，完全满足生物安全性要求，具有较大的应用前景。

技术领域

本发明涉及反向遗传学技术和动物疫苗技术领域，更具体地，涉及一种全禽源H5N2亚型禽流感重组毒株、疫苗制备方法、疫苗组合物和应用。

背景技术

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一种感染和/或疾病综合征，严重影响家禽养殖业的发展并威胁人类健康，家禽感染后可表现出不同的临床症状，根据致病性不同可将其分为低致病性禽流感（Low pathogenicavian influenza，LPAI）和高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza，HPAI）。H5亚型高致病性禽流感自2003年以来一直在中国以及世界各地区发生流行甚至暴发疫情；自2016年以来，我国H5亚型高致病性禽流感疫情数量明显增多，而H5N6已成为影响我国养禽业最主要的血清型。迄今为止，WHO已报道国内经实验室确诊的人感染甲型H5N6流感病毒病例共24例（https://apps.who.int/iris/handle/10665/330697）。因此H5亚型禽流感病毒的防控对养禽业的发展和公共卫生安全均有重要意义。

灭活疫苗是我国控制H5亚型禽流感的有效措施之一，禽流感灭活疫苗对免疫效果起决定作用的是HA蛋白；但在疫苗、药物和病毒自身的压力下，H5亚型禽流感病毒的HA基因进化速度非常快，现有的疫苗已经无法有效地对新型H5亚型分支的禽流感病毒进行防控。面对禽流感病毒的不断进化，H5亚型禽流感疫苗需要及时更新，以满足对当前流行的H5亚型禽流感病毒的防控。为了满足灭活疫苗的快速大规模生产需求，需具有以下条件：一、筛选当前合适的H5亚型禽流感流行病毒株制备成疫苗种毒；二、疫苗种毒需要保持低致病性甚至无致病性，且保持原来的免疫原性；三、种毒在鸡胚中培养能保持较高的病毒滴度。

目前，利用反向遗传学技术构建禽流感疫苗种毒是常用的技术手段，该技术在体外对病毒基因进行改造，拯救出生产所需的毒株，满足灭活疫苗的快速大规模生产。在人用流感疫苗中，通过选择利用人流感疫苗骨架来构建重组禽流感疫苗（例如：Hoffmann E,Krauss S, Perez D et al. Eight-plasmid system forrapid generation ofinfluenza virus vaccines. Vaccine, 2002, 20:3165- 3170），由于含有人源基因，容易造成重组禽流感疫苗感染人类的风险，安全性无法保证。因此开发无致病性，且可保持病毒的免疫原性，同时能在鸡胚培养过程中保持较高病毒滴度的H5亚型禽流感疫苗种毒株迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种全禽源H5N2亚型禽流感重组毒株。

本发明的第二个目的在于提供所述全禽源H5N2亚型禽流感疫苗的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供所述全禽源H5N2亚型禽流感疫苗的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：