[发明专利]高产维生素B2

权利要求书

1.高产维生素B₂枯草芽孢杆菌工程菌株，其特征在于，枯草芽孢杆菌中阿拉伯糖操纵子阻遏蛋白基因araR被ParaR-neo反选盒替换，并在其基因组中引入rib操纵子非翻译区突变以解除下游产物对核黄素操纵子的转录调控、引入G596A突变的ribC和引入P242L突变的purA，以使二者的表达量降低或表达的蛋白活性降低；所述菌株基因组中引入rpe表达量降低或表达的蛋白活性降低的突变或者敲除rpe；其中，ribC和purA的突变位点是相应于来自Bacillus subtilis 168的相应基因所编码的氨基酸序列的位点；

在所述菌株中还进行下述之一的基因改造：

（1）敲除嘌呤转运蛋白基因pbuG和nupG，或降低嘌呤转运蛋白基因pbuG和nupG的表达或降低其表达蛋白的活性；

（2）在所述菌株中敲除嘌呤转运蛋白基因pbuG、nupG、nupN和pbuX，或降低嘌呤转运蛋白基因nupN、pbuX、pbuG和nupG的表达或降低其表达蛋白的活性；

（3）在所述菌株中敲除嘌呤转运蛋白基因nupN、pbuX、pbuO、pbuG和nupG，或降低嘌呤转运蛋白基因nupN、pbuX、pbuO、pbuG和nupG的表达或降低其表达蛋白的活性。

2.如权利要求1所述的高产维生素B₂枯草芽孢杆菌工程菌株，其特征在于，rib操纵子非翻译区突变具体是rib操纵子的转录起始位点后第39位的G突变为A，所述突变位点是相应于来自Bacillus subtilis 168的rib操纵子核苷酸酸序列的位点。

3.如权利要求1所述的高产维生素B₂枯草芽孢杆菌工程菌株，其特征在于，进一步在所述菌株基因组中引入rpe表达活性降低的突变是引入A504del突变的 rpe，所述突变位点是相应于来自Bacillus subtilis 168的rpe基因编码的氨基酸序列的位点。

4.如权利要求1至3任一项所述的高产维生素B₂枯草芽孢杆菌工程菌株，其特征在于，原始出发菌株是Bacillus subtilis 168。

5.如权利要求1至3任一项所述的高产维生素B₂枯草芽孢杆菌工程菌株，其特征在于，涉及引入的外源基因是采取无痕引入方式。

6.如权利要求1至5任一项所述的高产维生素B₂枯草芽孢杆菌工程菌株的制备方法，其特征在于通过遗传操作方法来实现。