[发明专利]基于心源性休克大鼠模型的代谢组学分析方法

权利要求书

1.基于心源性休克大鼠模型的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤如下：

步骤一、采用左冠状动脉前降支近心尖端、远心尖端结扎法复制早、中期心源性休克大鼠模型；

步骤二、基于超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱仪，采集大鼠心源性休克早、中期血浆样品的代谢图谱信息；

步骤三、数据预处理；

步骤四、进行多变量统计分析，筛选出有显著性差异的生物标志物群；

步骤五、分析其参与的代谢通路,探讨参附注射液治疗心源性休克早、中期的作用机制。

2.如权利要求1所述的基于心源性休克大鼠模型的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤二具体过程如下：

1、血浆样品制备：将冻存大鼠血浆室温解冻，取100ul血浆于1.5mlEP管，加甲醇300ul，涡旋混匀1min，4℃恒温静置3h，离心后取上清液于1.5mlEP管，30℃水浴氮气吹干，保存至-80℃；复溶：加水-甲醇溶液200ul定容，涡旋混匀1min，离心，取上清液于样品瓶，既得；

2、血浆样品测定条件：

(1)质谱条件:电离源温度100℃，锥孔气为氮气，流速50L/h；去溶剂气为氮气，温度400℃，流速800L/h；正离子模式下毛细管电压为3.0kV，锥孔电压为40V，提取锥孔电压为80V，采集时间为0～25min,质量数范围为50～1000Da；负离子模式下毛细管电压为2.5kV，锥孔电压为40V，补偿电压为80V；采用甲酸钠建立质量轴标准曲线，亮氨酸脑啡肽进行实时质量校正；串联质谱碰撞气为氩气，低碰撞能为4eV，高碰撞能为20～40eV；

使用质控样品进行方法验证，质控样品由每个正常样品各取5μL混合而得；样品的检测过程中，每检测7个正常样品后运行1次QC样品以衡量系统的稳定性，样品的检测顺序为随机进行；

(2)色谱条件：其中正离子模式色谱条件:水相A：超纯水(0.1％甲酸)，有机相B：乙腈；水相A：超纯水(0.1％甲酸)，有机相B：乙腈；梯度洗脱：0～2min,0.1％B；2～6.4min,0.1％～22％B；6.4～9min,22％～35％B；9～22min,35％～100％B；22～24min,100％B；24～32min,100％～90％B；32～34min,90％～0.1％B；34～36min,0.1％B；柱温40℃，样品室温度10℃，流速为0.4ml/min，进样量为1ul。负离子模式色谱条件：水相A：超纯水，0.1％甲酸；有机相B：乙腈；梯度洗脱：0～20min,5％～95％B；20～23min,95％～5％B；柱温40℃；样品室温度10℃；流速为0.3ml/min；进样量为1ul；

(3)测定仪器、色谱柱和图谱采集软件

WatersAcquity UPLC液相色谱系统、Q-TOF SYNAPT G2 HDMS质谱仪和Waters ACQUITYUPLC BEH C₁₈色谱柱，通过MarkerLynx软件采集大鼠心源性休克早、中期血浆样品的代谢图谱。

3.如权利要求1所述的基于心源性休克大鼠模型的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤三中，基于ProgenesisQi软件对采集得到的谱图进行峰提取、峰对齐、峰匹配和峰强度校正等，获得包含化合物保留时间和质荷比信息的csv格式文件。

4.如权利要求1所述的基于心源性休克大鼠模型的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤四中，利用EZinfo 2.0统计软件进行多变量统计分析，筛选出有显著性差异的生物标志物群。

5.如权利要求4所述的基于心源性休克大鼠模型的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤四中，设计好实验分组,将处理后的数据矩阵导入EZinfo 2.0统计软件进行多变量统计分析，进行有监督的偏最小二乘判别分析，对组别进行分类并判别组间差异,选择显著性差异P小于0.05、投影变量大于1的变量作为生物标记物,此时得到其保留时间和质核比信息；基于生物学数据库筛选出大鼠内源性生物标记物并对其进行鉴定。

6.如权利要求1所述的基于心源性休克大鼠模型的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤五中，通过Metaboanalyst.ca网站分析其参与的代谢通路,探讨参附注射液治疗心源性休克早、中期的作用机制。