[发明专利]一种葡萄糖异构酶、突变体及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种葡萄糖异构酶突变体，其特征在所述葡萄糖异构酶突变体为下列之一：（1）SEQID NO.2所示氨基酸序列的第38位的亮氨酸突变为甲硫氨酸；（2）SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第137位的缬氨酸突变为亮氨酸；（3）SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第38位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，同时第137位的缬氨酸突变为亮氨酸。

2.编码权利要求1所述葡萄糖异构酶突变体的基因。

3.含有权利要求2所述编码基因的重组菌。

4.权利要求1所述葡萄糖异构酶突变体在微生物催化D-葡萄糖异构化制备高果糖浆F-55中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述应用为：以含葡萄糖异构酶或其突变体基因的重组基因工程菌经发酵诱导培养获得的湿菌体为酶源，以D-葡萄糖为底物，以镁离子和钴离子为助催剂，以超纯水为反应介质，在75~85℃、100~200 r/min条件下反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得高果糖浆F-55。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于反应体系中，湿菌体用量为50~150g/L，镁离子终浓度为5~25mM，钴离子终浓度为0.1~5mM，底物初始浓度为50~500g/L。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述湿菌体按如下方法制备获得：将含葡萄糖异构酶或其突变体基因的重组基因工程菌接种至含终浓度50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37 ℃、200 r/min培养至OD₆₀₀=0.8~1.0，获得种子液；种子液以体积浓度1~5%的接种量转入含终浓度50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，于37 ℃、150 r/min培养至OD₆₀₀=0.6~0.8，添加终浓度0.1 mM的IPTG，于28 ℃、150 r/min诱导培养10~12 h，获得诱导培养菌悬液，将诱导培养菌悬液离心，收集得到湿菌体。