[发明专利]一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法

权利要求书

1.一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：

体外高通量筛选模型构建：建立α-葡萄糖苷酶和底物pNPG的体外反应模型，利用酶标仪检测生成物PNP的吸光值变化，进而反映中药材对酶的抑制活性；

药材库的建立：选取不同种类的中药材，粉碎后用不同浓度的有机试剂进行提取，获得提取液，建立药材库；

活性筛选：对药材库中的提取液进行过滤，取上清液稀释后加入反应模型使用酶标仪记录起吸光度并绘制曲线，将样品吸光度曲线与空白吸光度曲线进行对照，计算抑制效果。

2.根据权利要求1所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法，其特征在于：所述体外反应模型的反应底物组分为0.05-0.1mol/L、pH6.8-7.2的磷酸钠缓冲液50-150μL，0.8-1U/mLα-葡萄糖苷酶10～25μL，0.00193-0.00232mol/L pNPG溶液10-25μL。

3.根据权利要求1所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法，其特征在于：所述药材库建立步骤中，药材粉碎粒度为20-100目。

4.根据权利要求3所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法，其特征在于：所述药材库建立步骤中，分别用30％-90％浓度的乙醇溶液对药材进行提取，提取料液比为1:10-20，提取时间40-60min。

5.根据权利要求1所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法，其特征在于：所述活性筛选步骤中，使用酶标仪对生成物吸光度进行测定时，测定波长为400-405nm。

6.根据权利要求5所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法，其特征在于：所述活性筛选步骤中，每1min进行一次测定，持续90min。

7.根据权利要求1所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法，其特征在于：所述活性筛选步骤中，用空白吸光度曲线下面积(AUC_空白)减去样品作用曲线下的积分面积(AUC_样品)，得出曲线下净面积(Net AUC)，曲线下净面积(Net AUC)与空白曲线下面积的比值即为抑制率，计算公式为：

抑制率％＝(AUC_空白-AUC_样品)/AUC_空白×100。

8.根据权利要求7所述一种具有α-葡萄糖苷酶抑制功效的中药材的高通量筛选方法，其特征在于：当抑制率为正数时证明该样品中具有抑制α-葡萄糖苷酶的能力，也说明该药材具有降血糖的功效；反之，抑制率为负数时，说明该样品不具备抑制α-葡萄糖苷酶的能力。