[发明专利]一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法

说明书

本发明公开了一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，涉及精子DFI质控品领域，包括精子DFI质控品试验过程中使用的成分：500ml～1000ml鸡红细胞液、150ml～500mlMACS溶液、100ml～200ml浓度为25％～30％的双氧水和150ml～500mlMACS含细胞保护液的MACS溶液，有益效果：通过采用鸡红细胞模拟精子细胞，经过过氧化氢处理鸡红细胞使其DNA碎片化，通过一定比例和正常细胞混合，可控制DFI的值，使用细胞保护成分让细胞在常规储存温度下长期保存，并且DFI值不受储存条件的影响。

技术领域

本发明涉及精子DFI质控品领域，具体为一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法。

背景技术

精子DFI检测是精子DNA碎片化检测的缩写，是一个关于精子质量的检测过程，精子DNA碎片化程度被认为是一个新的评价精子质量和预测生育能力的指标，采用流式细胞仪检测精子DFI已被广泛应用于临床。

但是精子DFI检测试剂在市面上性能不一，检测结果无法准确保证，部分实验室采用真实精子样本作为实验室内部质控，存在的问题有：无法在实验室间进行质控，需要液氮储存，DFI值无法控制，无法大规模在临床上进行推广等问题。

发明内容

基于此，本发明的目的是提供一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，包括精子DFI质控品试验过程中使用的成分： 500ml～1000ml鸡红细胞液、150ml～500mlMACS溶液、100ml～200ml浓度为 25％～30％的双氧水和150ml～500mlMACS含细胞保护液的MACS溶液。

通过采用上述技术方案，具有使用方便，储存方便，结果稳定，监测试剂性能，便于临床使用等进步之处。

本发明进一步设置为，所述精子DFI质控品的制备方法：

A1、使用离心机离心500ml～1000ml鸡红细胞液，离心5min～10min，设定温度为10℃～40℃，升降速率均为5～9次；

A2、离心完成后弃上清，加入150ml～500ml的MACS溶液混匀重悬，将鸡红细胞分成两份并离心；

A3、将其中一份离心完成后弃上清，向离心管中加入150ml～500mlMACS的含细胞保护液的MACS溶液，混匀后放4℃`8℃冰箱存放备用；

A4、打开20℃～25℃烘箱备用，将另一份离心完成后弃上清，离心管中加入 150ml～500ml体积的MACS溶液重悬，混匀后加入悬液100ml～200ml浓度为30％的双氧水,混匀后立即放入20℃～25℃烘箱中反应1～2小时，注意离心管盖不要拧得太紧；

A5、反应结束后，取出离心管离心，弃上清，加入150ml～500mlMACS溶液清洗3次，最后用150ml～500ml含细胞保护液的MACS溶液重悬，并转移到新的离心管中备用；

A6、通过流式细胞仪或者显微镜对两组细胞进行计数，可配制成DFI值为 0％-100％的细胞混合物。

通过采用上述技术方案，通过采用鸡红细胞模拟精子细胞，经过过氧化氢处理鸡红细胞使其DNA碎片化，通过一定比例和正常细胞混合，可控制DFI 的值，使用细胞保护成分让细胞在常规储存温度下长期保存，并且DFI值不受储存条件的影响，具有使用方便，储存方便，结果稳定，监测试剂性能，便于临床使用等进步之处。

本发明进一步设置为，所述A2步骤中的两份鸡红细胞中每份鸡红细胞皆有200ml～500ml，鸡红细胞液是SPF鸡或者公鸡的血液，采血时，要加入一定的抗凝剂。

通过采用上述技术方案，鸡红细胞使用时，有利于防止制作的过程中红细胞出现凝固，影响制作效果。