[发明专利]一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法

权利要求书

1.一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，包括精子DFI质控品试验过程中使用的成分：500ml～1000ml鸡红细胞液、150ml～500mlMACS溶液、100ml～200ml浓度为25％～30％的双氧水和150ml～500mlMACS含细胞保护液的MACS溶液。

2.根据权利要求1所述的一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于：所述精子DFI质控品的制备方法：

A1、使用离心机离心500ml～1000ml鸡红细胞液，离心5min～10min，设定温度为10℃～40℃，升降速率均为5～9次；

A2、离心完成后弃上清，加入150ml～500ml的MACS溶液混匀重悬，将鸡红细胞分成两份并离心；

A3、将其中一份离心完成后弃上清，向离心管中加入150ml～500mlMACS的含细胞保护液的MACS溶液，混匀后放4℃`8℃冰箱存放备用；

A4、打开20℃～25℃烘箱备用，将另一份离心完成后弃上清，离心管中加入150ml～500ml体积的MACS溶液重悬，混匀后加入悬液100ml～200ml浓度为30％的双氧水,混匀后立即放入20℃～25℃烘箱中反应1～2小时，注意离心管盖不要拧得太紧；

A5、反应结束后，取出离心管离心，弃上清，加入150ml～500mlMACS溶液清洗3次，最后用150ml～500ml含细胞保护液的MACS溶液重悬，并转移到新的离心管中备用；

A6、通过流式细胞仪或者显微镜对两组细胞进行计数，可配制成DFI值为0％-100％的细胞混合物。

3.根据权利要求1所述的一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于：所述A2步骤中的两份鸡红细胞中每份鸡红细胞皆有200ml～500ml。

4.根据权利要求1所述的一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于：所述制作步骤中所使用的离心管为圆底离心管，用离心管离心时需要上下缓慢颠倒离心管，弃上清直至上清液清凉透明为止。

5.根据权利要求1所述的一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于：所述重悬具体操作是用适当的MACS溶液将离心得到的细胞和活性物质等重新悬浮。

6.根据权利要求1所述的一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于：所述含细胞保护液的MACS溶液的成分包括130ml～480mlMACS溶液、3ml～5ml甘油和1ml～3ml海藻糖。

7.根据权利要求1所述的一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于：所述鸡红细胞液是SPF鸡或者公鸡的血液，采血时，要加入一定的抗凝剂。