[发明专利]特异性靶向人AXL基因的sgRNA及其应用

权利要求书

1.特异性靶向人AXL基因的sgRNA，其特征在于，所述的sgRNA由sgRNA3、sgRNA4、sgRNA5、sgRNA8组成，所述sgRNA3、sgRNA4位于人AXL基因剪切变体201和202共同第一外显子区，所述sgRNA5、sgRNA8位于人AXL基因剪切变体203第一外显子区，所述的sgRNA3序列如SEQ ID NO.3所示，所述的sgRNA4序列如SEQ ID NO.4所示，所述的sgRNA5序列如SEQ IDNO.5所示，所述的sgRNA8序列如SEQ ID NO.8所示，所述的sgRNA为由sgRNA3、sgRNA4、sgRNA5、sgRNA8串联形成的sgRNA。

2.一种基因编辑载体，其特征在于，所述的载体包含权利要求1所述的sgRNA。

3.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1所述的sgRNA或权利要求2所述的载体。

4.一种体外基于CRISPR系统构建人AXL基因敲除细胞的方法，其特征在于，所述的方法向细胞中递送权利要求1所述的sgRNA或权利要求2所述的载体，得到人AXL基因敲除的细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的细胞包括PANC-1细胞。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：

(1)构建携带权利要求1所述sgRNA的重组质粒；

(2)将步骤(1)中的重组质粒与Cas9表达载体转染到细胞中。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，转染时Cas9表达载体与重组质粒的质量比为2:1。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，(1)包括步骤：

a.扩增含有权利要求1所述sgRNA的片段；

b.将扩增产物与质粒连接；

c.将连接产物进行转化、鉴定。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的sgRNA为多重sgRNA。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，扩增多重sgRNA的引物序列如SEQ IDNO.29-34所示。

11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，扩增sgRNA的模板为pUC57-U6-sgRNA。

12.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，连接质粒为pGL3-U6-sgRNA-PGK-Puro。

13.一种人AXL基因敲除细胞，其特征在于，所述的细胞是采用权利要求4-12任一项所述的方法构建。

14.根据权利要求13所述的细胞，其特征在于，所述的细胞包括PANC-1细胞。

15.一种组合物，其特征在于，所述的组合物包括权利要求1所述的sgRNA或权利要求2所述的载体。

16.如下任一项所述的应用：

(1)权利要求1所述的sgRNA或权利要求2所述的载体或权利要求3所述的试剂盒在制备敲除人AXL基因的产品中的应用；

(2)权利要求1所述的sgRNA在构建人AXL基因编辑载体中的应用；

(3)权利要求1所述的sgRNA或权利要求2所述的载体或权利要求3所述的试剂盒在体外构建人AXL基因敲除的细胞中的应用；

(4)权利要求15所述的组合物在制备预防和/或治疗癌症的药物中的应用。

17.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述的细胞包括PANC-1细胞。