[发明专利]一种检测病原微生物的方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测病原微生物的方法及试剂盒，属于病原检测技术领域，该试剂盒包括突变型的逆转录酶和突变型的Tn5转座酶，该方法利用突变型的逆转录酶和突变型的Tn5转座酶进行测序文库构建，再经文库纯化和质检后进行测序，分析结果后完成检测。本发明提供的检测病原微生物的试剂盒，突变型的逆转录酶和突变型的Tn5转座酶的作用效率显著提高，使得文库构建所需的核酸量较一般市售试剂盒更低，最少取1ng的核酸即可进行准确检测；本发明提供的检测病原微生物的方法，最快2h即可完成检测，大大缩短了检测时间。

技术领域

本发明属于病原检测技术领域，具体涉及一种检测病原微生物的方法及试剂盒。

背景技术

感染性疾病是临床常见疾病之一，多数感染性疾病是由特定的病原体引起，例如细菌、病毒、真菌、寄生虫。患者常出现局部或全身性的炎症及器官功能障碍，其中一些感染性疾病病程进展快，死亡率高。因此快速检测出临床样本中的病原微生物对于感染性疾病的诊断治疗具有重要的临床意义。目前临床的病原体检测方法主要包括涂片镜检、分离培养、免疫学检测等，这些方法普遍存在阳性率低、检测周期长、操作繁琐等问题。

随着宏基因组测序方法的发展，宏基因组和宏转录组测序在病原体检测方面的应用越来越广泛。宏基因组和宏转录组测序是对特定环境样本中的DNA和RNA进行高通量测序，能够在短时间内准确、高效地得到整个病原体群体的基因组和转录组信息，该技术相比传统方法更为灵敏，能够获取环境中丰度较低的病原体信息，进而在临床诊断领域上多应用于感染类型诊断、耐药基因鉴定和传染病的预防和控制。

目前用于病原体检测的方法以及用于病原体检测的二代测序产品，多数只检测DNA病原体，或者只检测RNA病原体；若要同时检测DNA病原体和RNA病原体，在构建文库时需要分成DNA文库和RNA文库，检测流程繁杂，数据分析费时费力且检测费用昂贵，临床上难以推广。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种能够同时且快速对DNA和RNA进行检测的方法及试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种检测病原微生物的试剂盒，包括逆转录酶和Tn5转座酶；

所述逆转录酶为突变型逆转录酶，所述突变型逆转录酶的突变位点为：P55I、D204E、T334S、E566Q、D587N和L607I；

所述Tn5转座酶为突变型Tn5转座酶，所述突变型Tn5转座酶的突变位点为：K54E、I64Y、K160R、K200R和S303G。

本发明采用的另一种技术方案为：一种检测病原微生物的方法，包括以下步骤：

步骤1、提取样本的DNA和RNA，然后加入无核酸酶水进行孵育；

步骤2、在步骤1所得孵育后的核酸中加入逆转录酶，使RNA逆转录，然后加入Tn5转座酶进行片段化，片段化结束加入终止液停止片段化反应；

步骤3、对步骤2所得产物进行链置换、文库富集、文库纯化和质检后进行测序；

所述逆转录酶为突变型逆转录酶，所述突变型逆转录酶的突变位点为：P55I、D204E、T334S、E566Q、D587N和L607I；

所述Tn5转座酶为突变型Tn5转座酶，所述突变型Tn5转座酶的突变位点为：K54E、I64Y、K160R、K200R和S303G。

本发明的有益效果在于：本发明提供的检测病原微生物的试剂盒，包括突变型的逆转录酶和突变型的Tn5转座酶进行，在用于进行检测时，逆转录酶和Tn5转座酶的作用效率显著提高，使得文库构建所需的核酸量较一般市售试剂盒更低，最少取1ng的核酸即可进行准确检测；