[发明专利]一种以太子参TuMV-phe病毒基因为基础修饰改造病毒表达载体的方法有效
| 申请号： | 202110548661.8 | 申请日： | 2021-05-20 |
| 公开（公告）号： | CN113355352B | 公开（公告）日： | 2022-11-22 |
| 发明（设计）人： | 李明杰;古力;杨小文;孙瑞斌;许启棉;王建明;林文明;林梅桂;袁飞越;张立栋;张重义 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学;福建天人药业股份有限公司;焦作市玖道种苗繁育有限公司;泰宁县古农堂生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/83 | 分类号： | C12N15/83;C12N15/65;C12N15/64;A01H5/00;A01H6/82;A01H6/30 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 太子参 tumv phe 病毒 基因 基础 修饰 改造 表达 载体 方法 | ||
1.一种以太子参TuMV-phe病毒基因为基础修饰改造病毒表达载体的方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）选择太子参TuMV-phe病毒基因组作为改造源，在TuMV-phe病毒基因组内编码NIb和CP蛋白基因间添加NIa-Pro酶切识别位点和限制性酶切位点，将修饰后的TuMV-phe克隆至植物表达载体pCB301内，构建获得TuMV-phe基础上的病毒表达载体TuMV-phece和TuMV-phecc；
（2）将TuMV-phe基础上的病毒表达载体TuMV-phecc转入农杆菌GV3101内，筛选阳性GV3101并扩大培养，收集GV3001菌体，用农杆菌侵染液将其稀释到OD600=0.8；用浸润法将配置好的农杆菌对4叶期的烟草幼苗侵染，同步对经过炼苗训练的太子参脱毒苗进行侵染；
所述TuMV-phece和TuMV-phecc表达载体为先在TuMV-phe的NIb和CP间5’位置插入Nie酶切位点和限制性酶切位点NheI，3’加入了NcoI限制性酶切位点；所述的太子参TuMV-phe病毒基因其序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种以太子参TuMV-phe病毒基因为基础修饰改造病毒表达载体的方法，其特征在于：选择Ros1基因和EGFP基因作为报告基因来评测TuMV-phe病毒基础上表达载体的外源表达蛋白能力。
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