[发明专利]一种基于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法

说明书

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法。步骤为：将氯化锆和2‑氨基对苯二甲酸溶于DMF中，经超声、加热、冷却、洗涤、干燥，得到的材料溶于Tris‑HCl缓冲溶液中，加入FAM‑ssDNA，涡旋混匀后于室温下反应，得到适配体荧光传感器；本发明制备的适配体荧光传感器能够特异性识别丙烯酰胺，实现油炸食品中丙烯酰胺含量的检测；本发明操作简单、检测快速、准确，适用于真实食品样品的检测，有利于保障食品的质量与安全。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种适配体荧光探针检测油炸食品中丙烯酰胺含量的方法。

技术背景

丙烯酰胺是一种有害的有机化合物，可以引起遗传毒性、肌肉无力、神经毒性、感觉丧失和致癌性。1994年，世界卫生组织国际癌症研究机构已将丙烯酰胺列为第二类致癌物。人们可以通过皮肤、粘膜、呼吸道和消化道接触到丙烯酰胺，其中饮食是人与丙烯酰胺接触的重要途径。许多经高温加热烹饪出的食品均含有高水平的丙烯酰胺，特别是加工富含淀粉和蛋白质的食物，例如马铃薯、大米和高粱等等，长期摄入此类食物会影响人们的身体健康。因此，快速、准确地检测食品中丙烯酰胺的含量，以保障食品安全和产品消费者的健康是十分有必要的。

目前丙烯酰胺的检测主要依靠传统的技术包括高效液相色谱法、气相色谱-质谱法和酶联免疫吸附法等。尽管这些方法能准确检测出丙烯酰胺的含量，但它们往往因前处理方法繁琐、耗时长、费用高，同时需要专业的技能等原因造成了一定的局限性，不利于实现快速检测。近年来，荧光传感技术由于其操作简单，耗时短而备受关注，但目前有关荧光传感技术检测丙烯酰胺的研究较少。因此，迫切需要设计和开发一种荧光探针以实现油炸食品中丙烯酰胺的灵敏检测。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在解决所述问题之一；本发明开发一种适配体荧光探针，能够实现油炸食品中丙烯酰胺的低成本、高灵敏和特异性检测，克服现有丙烯酰胺检测技术操作复杂、耗时长，制备复杂等缺点。

为了实现以上目的，本发明具体包括以下步骤：

步骤1、将氯化锆和2-氨基对苯二甲酸溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，超声、加热，待反应物冷却后，经洗涤、干燥，得到黄色的金属有机框架材料，记为UiO-66-NH₂材料；

步骤2、将步骤1制备的UiO-66-NH₂材料溶于Tris-HCl缓冲溶液中，加入6-羧基荧光素染料修饰的丙烯酰胺荧光适配体链溶液(FAM-ssDNA溶液)，涡旋混匀后于室温下进行反应，得到适配体荧光传感器溶液，记为MOF-aptamer适配体荧光探针溶液；

步骤3、建立检测丙烯酰胺的线性回归方程：配制不同浓度的丙烯酰胺溶液，将不同浓度的丙烯酰胺溶液加入到步骤2制备的MOF-aptamer适配体荧光探针溶液中，一种浓度的丙烯酰胺溶液对应加入一种MOF-aptamer适配体荧光探针溶液，静置反应后分别向上述溶液中加入6-羧基荧光素染料修饰的丙烯酰胺荧光适配体链的互补链溶液(csDNA溶液)，得到混合溶液于室温下孵育；最后置于荧光分光光度计中测量上述混合溶液的荧光强度值I₅₂₀，根据检测所述的荧光强度值与所对应的丙烯酰胺浓度对数值log(c)之间的关系，建立检测丙烯酰胺的线性回归方程；

步骤4、食品样品中丙烯酰胺的检测分析：根据国标《GB 5009.204-2014食品中丙烯酰胺的测定-稳定性同位素稀释的液相色谱-质谱/质谱法》对样品进行预处理，得到样品提取液；然后将样品提取液，加入到制备的MOF-aptamer适配体荧光探针溶液中，室温下静置反应，随后加入csDNA溶液，在室温下孵育后于荧光分光光度计中测量上述混合溶液的荧光强度值I₅₂₀，将样品的荧光强度值带入到步骤S1中建立的丙烯酰胺线性回归方程，计算出样品中丙烯酰胺的浓度。