[发明专利]一种基于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法

权利要求书

1.一种基于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、将氯化锆和2-氨基对苯二甲酸溶于N,N-二甲基甲酰胺中，超声、加热，待反应物冷却后，经洗涤、干燥，得到黄色的金属有机框架材料，记为UiO-66-NH₂材料；

步骤2、将步骤1制备的UiO-66-NH₂材料溶于Tris-HCl缓冲溶液中，加入6-羧基荧光素染料修饰的丙烯酰胺荧光适配体链溶液，涡旋混匀后于室温下进行反应，得到适配体荧光传感器溶液，记为MOF-aptamer适配体荧光探针溶液；所述的UiO-66-NH₂材料、6-羧基荧光素染料修饰的丙烯酰胺荧光适配体链溶液和Tris-HCl缓冲溶液的用量比为0.1～0.5g：100～200μL：2～10mL；

步骤3、建立检测丙烯酰胺的线性回归方程：配制不同浓度的丙烯酰胺溶液，将不同浓度的丙烯酰胺溶液加入到步骤2制备的MOF-aptamer适配体荧光探针溶液中，一种浓度的丙烯酰胺溶液对应加入一种MOF-aptamer适配体荧光探针溶液，静置反应后分别向上述溶液中加入6-羧基荧光素染料修饰的丙烯酰胺荧光适配体链的互补链溶液，得到混合溶液于室温下孵育；最后置于荧光分光光度计中测量上述混合溶液的荧光强度值I₅₂₀，根据检测所述的荧光强度值与所对应的丙烯酰胺浓度对数值之间的关系，建立检测丙烯酰胺的线性回归方程；

步骤4、食品样品中丙烯酰胺的检测分析：首先制备样品提取液；然后将样品提取液，加入到制备的MOF-aptamer适配体荧光探针溶液中，室温下静置反应，随后加入csDNA溶液，在室温下孵育后于荧光分光光度计中测量上述混合溶液的荧光强度值I₅₂₀，将样品的荧光强度值带入到步骤S1中建立的丙烯酰胺线性回归方程，计算出样品中丙烯酰胺的浓度。

2.根据权利要求1所述的基于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于，步骤1中所述氯化锆、2-氨基对苯二甲酸和N,N-二甲基甲酰胺的用量比为0.133～0.164g：0.098～0.115g：25～40mL。

3.根据权利要求1所述的基于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于，步骤1中所述的超声的功率为60～100W，时间为5～10min；所述加热的温度为90～120℃，时间为10～24h；所述洗涤是用N,N-二甲基甲酰胺和乙醇溶液分别洗涤1～3次；所述干燥的温度为60～80℃，时间为24～48h。

4.权利要求1所述的基于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于，步骤2中所述的6-羧基荧光素染料修饰的丙烯酰胺适配体链的碱基序列为5’-FAM-ACC GCA TCA TGC CGA AAG GAC TAC CGG AAA CGG CAA ATC CTC G-3’；所述6-羧基荧光素染料修饰的丙烯酰胺适配体链溶液的浓度为5～10μM。

5.根据权利要求1所述的基于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于，步骤2中所述的Tris-HCl缓冲溶液的浓度为10mM，pH为7.4。

6.根据权利要求1所述的基于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于，步骤2中所述的涡旋混匀时间为1～2min；所述的反应时间为20～60min。

7.根据权利要求1所述的基于适配体荧光探针对油炸食品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于，步骤3中所述不同浓度的丙烯酰胺溶液的浓度范围为50nM～10μM；所述丙烯酰胺溶液与MOF-aptamer适配体荧光探针溶液混合时的体积比为1:1；所述静置时间为30～60min，孵育时间为60～90min。