[发明专利]盐酸格拉司琼中杂质E的HPLC测定方法

说明书

本发明提供了盐酸格拉司琼杂质E的检测方法，它采用高效液相色谱技术进行检测，使用了填料选自未经键合的亚乙基桥杂化颗粒或基于亚乙基桥杂化颗粒的三键键合酰胺基的色谱柱。本发明针对极性较大且几无紫外吸收的盐酸格拉司琼杂质E开发了一套新的色谱检测方法，该方法操作简便，结果准确可靠，可为盐酸格拉司琼原料药及制剂的质量控制提供参考。

技术领域

本发明涉及一种检测盐酸格拉司琼原料中杂质E的HPLC测定方法，属于药物杂质分析检测领域。

背景技术

1991年4月，盐酸格拉司琼注射液在法国上市，盐酸格拉司琼注射液作为抗肿瘤辅助药在临床上使用广泛，该品种已被中国、美国、欧洲药典收载。盐酸格拉司琼注射液中的活性成分盐酸格拉司琼，化学名称为1-甲基-N-[9-甲基-桥 -9-氮杂双环[3，3，1]壬烷-3-基]-1H-吲唑-3-甲酰胺盐酸盐，结构式如下，是一种高选择性的5-羟色胺3(5-HT3)受体拮抗剂，对因放疗、化疗及手术引起的恶心和呕吐具有良好的预防和治疗作用。

9-甲基-桥-9-氮杂双环[3,3,1]壬烷-3-胺(以下简称杂质E)为盐酸格拉司琼中的工艺杂质及降解产物，结构式见下式，中国药典原料药标准中未收载该杂质，美国药典及欧洲药典原料药标准中均采用薄层色谱法对该杂质进行限度检测，限度为0.5％。

然而，薄层色谱法灵敏度较低，难以满足对产品质量控制的更为精确的需求。

发明内容

高效液相色谱法，是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。然而，杂质E，结构简单，极性较大，使用常规反相液相色谱 (RP)，即便调整多种色谱条件，均无法满足分离要求，如以下色谱条件：

色谱条件1：

高效色谱仪：Thermo Vanquish(带CAD检测器)；

色谱柱：Agilent InfinityLabPoroshell 120EC-C184.6mm*100mm 2.7μm；

流动相：pH 2.0甲酸水溶液-乙腈(80:20)；

柱温：25℃；

流速：1.0ml/min；

进样体积：10μl。

样品溶液配制：取适量盐酸格拉司琼原料药、HCl、杂质E分别用20％甲醇溶解后，作为定位溶液。

测定：在上述色谱条件下进样空白溶液、HCl定位溶液，杂质E定位溶液、盐酸格拉司琼供试品溶液。

结果：该色谱条件下，杂质E几乎没有保留，很快被洗脱，且与盐酸峰重合完全，为提高杂质E的保留，增加其与盐酸的分离度，考虑降低流动相中乙腈的比例，同时降低流速,见色谱条件2。

色谱条件2：

高效色谱仪：Thermo Vanquish(带CAD检测器)；

色谱柱：Agilent InfinityLabPoroshell 120EC-C184.6mm×100mm 2.7μm；

流动相：pH 2.0甲酸水溶液-乙腈(95:5)；

柱温：25℃；

流速：0.5ml/min；

进样体积：10μl。

测定：