[发明专利]一种猪BRS3基因CDs序列全长分段克隆的方法

权利要求书

1.一种猪BRS3基因，其特征在于，所述基因CDs序列如SEQ ID NO：4所示。

2.根据权利要求1所述的猪BRS3基因CDs序列全长分段克隆的方法，其特征在于，将BRS3基因进行分段，通过分段克隆和基因拼接法获得猪BRS3基因序列。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将BRS3基因分为三段序列，分别为fragment 1、fragment 2和fragment 3；fragment 1、fragment 2和fragment 3彼此部分重叠，三段序列基因拼接后能够获得包含完整CDs序列的猪BRS3基因；fragment 1序列的5’端包括CDs序列的5’端，fragment 1序列的3’端和fragment 2序列的5’端部分序列重合，fragment 2序列的3’端和fragment 3序列的5’端部分序列重合，fragment 3序列的3’端包括CDs序列的3’端。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，fragment 1、fragment 2和fragment 3的序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，fragment 1、fragment 2和fragment 3PCR扩增引物如下：

fragment 1引物：

F1：ATGTCTTGAATTTGCTTGCCAT；

R1：TTACAGCCAATTCTTCCGAAC；

fragment 2引物：

F2：GGCGTTCCTAATGATACCAC；

R2：CATGGCTTTGTTCCTCCGTA；

fragment 3引物：

F3：TATTCTTTGATCGCTAGGACCC；

R3：GCCCAATAAGATCATTGTTCGT。

6.一种克隆载体，其特征在于，采用PCR扩增权利要求1所述的猪BRS3基因的CDs序列，得到BRS3全长CDs序列片段，并插入pMD19T质粒构建TA克隆载体，获得BRS3全长CDs序列的克隆载体pMD19T-BRS3。

7.根据权利要求6所述的克隆载体，其特征在于，PCR扩增引物为：

上游引物F：5’-GCTCTAGAATGGCTCAAAGGCAGC-3’；

下游引物R：5’-GGAATTCTTAGACTCTGTCTTCTTCCTTC-3’。

8.根据权利要求7所述的克隆载体，其特征在于，选择Xba I和EcoR I为插入的酶切位点，其中上游引物插入保护碱基GC和Xba I酶切位点TCTAGA；下游引物插入保护碱基G和EcoR I酶切位点GAATTC。

9.一种过表达载体，其特征在于，采用权利要求6所述的克隆载体pMD19T-BRS3和pCD513B1质粒经双酶切后用T4 DNA Ligase连接，重组构建慢病毒过表达载体pCD513B1-BRS3。

10.权利要求1所述基因、权利要求2～5任一项所述方法、权利要求6～8任一项所述克隆载体、或权利要求9所述过表达载体在猪的基因改造或育种中的应用。