[发明专利]一种大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法。它包括a.外植体的获得和消毒方法：b.不定芽诱导和继代增殖：c、生根培养：d、试管苗移栽：e、病毒检测。本发明利用茎尖为外植体结合高温和抗病毒药剂去除病毒生产出优质的无病毒种苗，实现了大花美人蕉快速繁殖，应用价值高。实施该发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行。

技术领域

本发明属于植物繁殖领域，具体涉及一种大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法。

背景技术

大花美人蕉(Canna x generalis)，属于美人蕉科(Cannaceae)美人蕉属(Canna)的园艺杂交种，原产美洲热带和非洲等地。其枝叶茂盛、花朵艳丽、姿态优美、花期长，在华南地区几乎全年可开花，是配置大型花坛的优良品种。但大花美人蕉常在生长过程中易受病毒侵染，特别是常采用根茎进行分株繁殖，病毒会积累并传给后代。美人蕉感染病毒后主要表现为花叶、具褪绿条纹、花小夹有杂色斑纹，植株矮化等症状，影响美人蕉的正常生长及观赏价值，感染的病毒有黄瓜花叶病毒(CMV)且分布广泛,其它还有菜豆黄花叶病毒(BYMV)、黄斑驳病毒(CaYMV)和烟草花叶病毒(TMV)等。

目前，国内外还没有大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法。

本发明的大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法，其包括以下步骤：

a.外植体的获得和消毒方法：

选择生长健壮的、表面无病毒感染症状的大花美人蕉优良母株，挖取根茎上2－4厘米长的嫩芽，擦拭干净后，经第一次消毒后，剥除嫩芽外面的嫩叶，再经第二次消毒，剥取2-4毫米的茎尖，接种于初代培养基中，所述的初代培养基为MS培养基+3.0-5.0毫克/升6-苄基嘌呤+8-12毫克/升抗病毒醚+蔗糖20-30克/升+琼脂，pH 5.8-6.0，先在黑暗条件下培养，培养温度35-37℃，然后将无污染并成活的茎尖在培养温度26-30℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小时/天下培养直至外植体基部有不定芽长出；

b.不定芽诱导和继代增殖：将3-4厘米高的不定芽切去上部叶片接种到不定芽诱导和继代增殖培养基中进行不定芽的诱导和增殖，所述的不定芽诱导和继代增殖培养基为MS培养基+3.0-5.0毫克/升6-苄基嘌呤+3.0-5.0毫克/升激动素+0.1-0.5毫克/升萘乙酸+8-12毫克/升抗病毒醚+蔗糖20-30克/升+琼脂，pH 5.8-6.0，先在35-37℃条件下暗培养，再移入光照下培养，培养温度26-30℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小时/天，然后将增殖芽接种到增殖培养基中进行增殖，所述的增殖培养基为MS培养基+3.0-5.0毫克/升6-苄基嘌呤+3.0-5.0毫克/升激动素+0.1-0.5毫克/升萘乙酸+蔗糖20-30克/升+琼脂，pH5.8-6.0；

c、生根培养：当芽高3-4厘米高时，切下接种到生根培养基中进行生根培养，所述的生根培养基为MS培养基+1.0-2.0毫克/升吲哚丁酸+1.0-2.0克/升活性炭+蔗糖15-20克/升+琼脂，pH 5.8-6.0，培养温度26-30℃，光照度1800-2500lx，光照12-16小时/天；

d、试管苗移栽：当生根试管苗长至5-6厘米高时，在自然光照下炼苗，然后打开瓶塞，把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入基质中，浇水、遮荫、保温和保湿；

e、病毒检测：取即将出瓶的试管苗进行病毒检测，获得无病毒感染的试管苗。

优选，所述的第一次消毒是用体积分数75％乙醇棉擦拭表面，浸泡在体积分数75％酒精中浸泡10-30秒后，再用质量分数1％次氯酸钠溶液消毒5-7分钟，无菌水冲洗4-6次。