[发明专利]一种大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.一种大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.外植体的获得和消毒方法：

选择生长健壮的、表面无病毒感染症状的大花美人蕉优良母株，挖取根茎上2－4厘米长的嫩芽，擦拭干净后，经第一次消毒后，剥除嫩芽外面的嫩叶，再经第二次消毒，剥取2-4毫米的茎尖，接种于初代培养基中，所述的初代培养基为MS培养基+3.0-5.0毫克/升6-苄基嘌呤+8-12毫克/升抗病毒醚+蔗糖20-30克/升+琼脂，pH 5.8-6.0，先在黑暗条件下培养，培养温度35-37℃，然后将无污染并成活的茎尖在培养温度26-30℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小时/天下培养直至外植体基部有不定芽长出；

b.不定芽诱导和继代增殖：将3-4厘米高的不定芽切去上部叶片接种到不定芽诱导和继代增殖培养基中进行不定芽的诱导和增殖，所述的不定芽诱导和继代增殖培养基为MS培养基+3.0-5.0毫克/升6-苄基嘌呤+3.0-5.0毫克/升激动素+0.1-0.5毫克/升萘乙酸+8-12毫克/升抗病毒醚+蔗糖20-30克/升+琼脂，pH 5.8-6.0，先在35-37℃条件下暗培养，再移入光照下培养，培养温度26-30℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小时/天，然后将增殖芽接种到增殖培养基中进行增殖，所述的增殖培养基为MS培养基+3.0-5.0毫克/升6-苄基嘌呤+3.0-5.0毫克/升激动素+0.1-0.5毫克/升萘乙酸+蔗糖20-30克/升+琼脂，pH5.8-6.0；

c、生根培养：当芽高3-4厘米时，切下接种到生根培养基中进行生根培养，所述的生根培养基为MS培养基+1.0-2.0毫克/升吲哚丁酸+1.0-2.0克/升活性炭+蔗糖15-20克/升+琼脂，pH 5.8-6.0，培养温度26-30℃，光照度1800-2500lx，光照12-16小时/天；

d、试管苗移栽：当生根试管苗长至5-6厘米高时，在自然光照下炼苗，然后打开瓶塞，把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入基质中，浇水、遮荫、保温和保湿；

e、病毒检测：取即将出瓶的试管苗进行病毒检测，获得无病毒感染的试管苗；

所述的不定芽诱导和继代增殖中在35-37℃条件下暗培养，是在黑暗条件下培养5天，且培养温度35-37℃。

2.根据权利要求1所述的大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的第一次消毒是用体积分数75％乙醇棉擦拭表面，浸泡在体积分数75％酒精中浸泡10-30秒后，再用质量分数1％次氯酸钠溶液消毒5-7分钟，无菌水冲洗4-6次。

3.根据权利要求1所述的大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的第二次消毒是将剥除外面的嫩叶的嫩芽放入质量分数0.1％升汞溶液消毒1-3分钟，无菌水冲洗4～6次。

4.根据权利要求1所述的大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的试管苗移栽中的基质是由泥炭土:珍珠岩＝2-4:1v/v混合而成的基质。

5.根据权利要求1所述的大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的病毒检测是取即将出瓶的试管苗叶片用酶联免疫吸附法进行病毒检测。

6.根据权利要求5所述的大花美人蕉去病毒优质种苗组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的病毒检测是对黄瓜花叶病毒、菜豆黄花叶病毒、黄斑驳病毒和烟草花叶病毒进行检测。