[发明专利]一种褐藻胶裂解酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种褐藻胶裂解酶突变体，其特征在于，所述突变体是以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的褐藻胶裂解酶为亲本，将亲本第29位天冬氨酸替换为谷氨酰胺。

2.编码权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体的基因。

3.携带权利要求2所述基因的质粒。

4.表达权利要求1所述突变体或携带权利要求2所述基因的重组细胞。

5.一种制备褐藻寡糖的方法，其特征在于，以海藻酸钠水溶液为底物，添加权利要求1所述褐藻胶裂解酶突变体，催化获得褐藻寡糖。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述海藻酸钠水溶液的浓度为0.2％～0.3％，所述褐藻胶裂解酶突变体的添加量为0.9U/g底物～1.2U/g底物。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述催化是在32℃～35℃反应4h～7h后，终止反应。

8.权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体，或权利要求2所述基因在生产褐藻寡糖中的应用。

9.一种制备权利要求1所述褐藻胶裂解酶突变体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)根据确定的突变位点，设计定点突变的突变引物，以携带褐藻胶裂解酶基因的载体为模板进行定点突变；构建含编码突变体的基因的质粒载体；

(2)将突变体质粒转化进宿主细胞；

(3)挑选阳性克隆进行发酵培养，离心收集细胞，细胞破壁上清即为褐藻胶裂解酶突变体的粗酶液。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述质粒载体为pET-28a(+)；所述宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。