[发明专利]一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物、检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物、检测试剂盒及其应用，属于细菌鉴定技术领域。本发明提供了基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物组，包括以下两种或多种引物对：特异性扩增金黄色葡萄球菌的引物对、特异性扩增沃氏葡萄球菌的引物对、特异性扩增表皮葡萄球菌的引物对、特异性扩增人葡萄球菌的引物对、特异性扩增头状葡萄球菌的引物对和特异性扩增溶血葡萄球菌的引物对。所述引物组具有扩增特异性好、检测灵敏度高、同时鉴定多种葡萄球菌的特点。基于所述引物组对环境中多种葡萄球菌检测方法，能够实现同时对多种葡萄球菌的鉴定，且具有检测时间短、检测成本低，检测结果准确可靠的特点。

技术领域

本发明属于细菌鉴定技术领域，具体涉及一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物、检测试剂盒及其应用。

背景技术

葡萄球菌属（Staphylococcus）是一群革兰氏阳性菌，是最常见的化脓性球菌，机体抵抗力低的老年、孕妇、新生儿等最易受到葡萄球菌侵染，引起天泡疮、结膜炎、脓毒血症等。此外，葡萄球菌还可在家禽中引起传染病，如脚垫肿、脐炎和葡萄球菌性败血症等，给养禽业造成较大的损失。

苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基基因(pheS)在同一物种的菌株中具有高度的同质性，在不同物种中该基因序列相似性较差，是一种快速进化的基因。有研究表明，pheS基因可作为环境菌种鉴定的可靠工具，是检测菌种的有效筛选方法。

现有技术中报道了利用gyrB特征序列检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法，该方法设计了针对金黄色葡萄球菌的引物组合，通过LAMP等温扩增对金黄色葡萄球菌进行检测，该方法可以在较短时间内获得检测结果，但该方法只能检测一种葡萄球菌，且针对实验动物金黄色葡萄球菌进行的检测，检测能力有限。目前还没有报道基于pheS特征序列在种水平上鉴定环境中多种葡萄球菌的引物及方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物、检测试剂盒及其应用，在种水平上鉴定环境中的金黄色葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、头状葡萄球菌以及溶血葡萄球菌。

本发明提供了一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物组，包括以下两种或多种引物对：特异性扩增金黄色葡萄球菌的引物对、特异性扩增沃氏葡萄球菌的引物对、特异性扩增表皮葡萄球菌的引物对、特异性扩增人葡萄球菌的引物对、特异性扩增头状葡萄球菌的引物对和特异性扩增溶血葡萄球菌的引物对；

所述特异性扩增金黄色葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO：2所示；

所述特异性扩增沃氏葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:3和SEQ IDNO：4所示；

所述特异性扩增表皮葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:5和SEQ IDNO：6所示；

所述特异性扩增人葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO：8所示；

所述特异性扩增头状葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:9和SEQ IDNO：10所示；

所述特异性扩增溶血葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:11和SEQ IDNO：12所示。

本发明提供了一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的DNA条形码，包括以下两种或多种DNA条形码：金黄色葡萄球菌的DNA条形码、沃氏葡萄球菌的DNA条形码、表皮葡萄球菌的DNA条形码、人葡萄球菌的DNA条形码、头状葡萄球菌的DNA条形码和溶血葡萄球菌的DNA条形码；

所述金黄色葡萄球菌的DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；

所述沃氏葡萄球菌的DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；