[发明专利]一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物、检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物组，其特征在于，由以下6对引物对组成：特异性扩增金黄色葡萄球菌的引物对、特异性扩增沃氏葡萄球菌的引物对、特异性扩增表皮葡萄球菌的引物对、特异性扩增人葡萄球菌的引物对、特异性扩增头状葡萄球菌的引物对和特异性扩增溶血葡萄球菌的引物对；

所述特异性扩增金黄色葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO：2所示；

所述特异性扩增沃氏葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO：4所示；

所述特异性扩增表皮葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO：6所示；

所述特异性扩增人葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO：8所示；

所述特异性扩增头状葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO：10所示；

所述特异性扩增溶血葡萄球菌的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO：12所示。

2.一组基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的DNA条形码，其特征在于，由以下六种DNA条形码组成：金黄色葡萄球菌的DNA条形码、沃氏葡萄球菌的DNA条形码、表皮葡萄球菌的DNA条形码、人葡萄球菌的DNA条形码、头状葡萄球菌的DNA条形码和溶血葡萄球菌的DNA条形码；

所述金黄色葡萄球菌的DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；

所述沃氏葡萄球菌的DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；

所述表皮葡萄球菌的DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；

所述人葡萄球菌的DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；

所述头状葡萄球菌的DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；

所述溶血葡萄球菌的DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示。

3.一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物组。

4.根据权利要求3所述检测试剂盒，其特征在于，还包括10× Taq buffer、 Taq DNAPolymerase、dNTPs和权利要求2所述DNA条形码。

5.权利要求1所述引物组、权利要求2所述DNA条形码或权利要求3或4所述检测试剂盒在制备鉴定葡萄球菌的试剂或试剂盒中的应用。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、头状葡萄球菌和溶血葡萄球菌。

7.一种快速鉴定环境中多种葡萄球菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将采集的环境细菌进行裂解，得到的裂解液固液分离，收集上清液；

2）以步骤1）所述上清液为模板，用权利要求1所述引物组进行PCR扩增，得到PCR产物；

3）将步骤2）所述PCR产物进行片段分析，获得如下扩增片段的样本说明含有对应种类的葡萄球菌；

金黄色葡萄球菌的扩增片段长度为434 bp；

溶血葡萄球菌的扩增片段长度为425 bp；

人葡萄球菌的扩增片段长度941 bp；

沃氏葡萄球菌的扩增片段长度为676 bp；

头状葡萄球菌的扩增片段长度为581 bp；

和表皮葡萄球菌的扩增片段长度为1004 bp。

8.根据权利要求7所述快速鉴定环境中多种葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤2）中所述PCR扩增的反应体系为10×Taq buffer 2 µl、Taq DNA Polymerase 0.3 µl、2.5 mMdNTPs 1.6 µl、10 μM上游引物 0.4 µl、10 μM下游引物0.4 µl、模板2 µl，ddH₂O补至20µl。