[发明专利]保健食品中肉碱对映体拆分和测定方法

权利要求书

1.基于超高效合相色谱技术的保健食品中肉碱对映体拆分和测定方法，该方法包括保健食品样品提取，标准溶液制备，衍生步骤，衍生后标准溶液和样品溶液分别进行超高效合相色谱分析，制作标准曲线并通过标准曲线计算样品溶液中L-肉碱、D-肉碱的含量与纯度；其特征在于，标准溶液和样品溶液分别进行超高效合相色谱分析分析条件如下：

色谱柱：Acquity Trefoil CEL1，填料为纤维素-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）；

流动相：A为CO₂，B为1%v/v氨水甲醇溶液；

梯度洗脱程序：0~7 min，流动相90%v/vA-10%v/vB；7~9 min，流动相90-72%v/vA-10%～28%v/v B；9～12 min，流动相72%v/vA-28%v/vB；12～13 min，流动相72-90%v/vA-28%～10%v/v B；13～14 min，流动相90%v/vA-10%v/vB；

系统背压：13.8 MPa；流速：1.0 mL/min；进样量：5 µL；柱温：40 ℃；检测波长：244 nm；

所述样品提取的步骤如下：取20粒保健品片剂、胶囊或颗粒，研细，准确称取1.00 g样品，精确至0.01g，置于25 mL容量瓶中，加入适量无水乙醇，超声提取20 min，冷却至室温后加无水乙醇定容，取适量定溶液至离心管中，高速离心5 min后，所得上清液待进一步衍生制备样品溶液；

所述衍生步骤如下所示：

取0.5mL上清液或混合工作溶液至离心管中，加入0.5 mL衍生试剂，涡旋混匀，依次加入0.5 mL催化剂Ⅰ和0.5 mL催化剂Ⅱ，涡旋混匀3 min，20 ℃衍生化60 min后，加入2.0 mL反应终止液，涡旋混匀1分钟后，离心5000 r/min，5 min，移取上层水相于100 mL 圆底烧瓶中，浓缩至近干，向浓缩瓶中加入1 mL 无水乙醇，涡旋溶解充分，过0.22 µm 滤膜入进样小瓶；

所述的衍生试剂为0.45 g/100 mL的L-丙氨酸-β-萘胺-乙腈溶液，所述的催化剂Ⅰ为0.50 g /100mL的三乙胺-三氯甲烷溶液，所述的催化剂Ⅱ为0.50 g /100mL的氯甲酸丁酯-三氯甲烷溶液，反应终止液为50 mmol/L的碳酸氢钠-水溶液。

2.根据权利要求1所述的基于超高效合相色谱技术的保健食品中肉碱对映体拆分和测定方法，其特征在于，标准溶液制备的步骤如下：移取0.5 mL L-肉碱、D-肉碱两种对映体的混合工作溶液于10 mL离心管中，再进一步衍生，制备成浓度为0.20、0.40、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00 mg/L的标准溶液。

3.根据权利要求1所述的基于超高效合相色谱技术的保健食品中肉碱对映体拆分和测定方法，其特征在于，L-肉碱、D-肉碱两种肉碱对映体的回收率范围为86.0% ~ 110%，相对标准偏差的范围为4.3% ~ 7.0%，相对标准偏差RSD，n=6。