[发明专利]检测生殖道常见病原体的核酸探针组合、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测生殖道常见病原体的核酸探针组合，其特征在于，包括：一组或多组多重特异性引物组合，和/或顺序固定于膜芯片表面的一条或多条探针组合；

所述引物组合包括生殖道常见病原体的引物和内源对照GAPDH基因的引物；所述探针组合包括生殖道常见病原体特异性探针、阳性杂交点探针和内源对照GAPDH基因的探针；所述生殖道常见病原体包括人型支原体、奈瑟淋球菌、沙眼衣原体、解脲脲原体、生殖支原体、人巨细胞病毒和单纯疱疹病毒Ⅱ型；

其中，人型支原体的正向引物序列如SEQ ID No.1所示、反向引物序列如SEQ ID No.2所示；探针序列如SEQ ID No.3所示；

奈瑟淋球菌的正向引物序列如SEQ ID No.4所示、反向引物序列如SEQ ID No.5所示；探针序列如SEQ ID No.6所示；

单纯疱疹病毒Ⅱ型的正向引物序列如SEQ ID No.7所示、反向引物序列如SEQ ID No.8所示；探针序列如SEQ ID No.9所示；

人巨细胞病毒的正向引物序列如SEQ ID No.10所示、反向引物序列如SEQ ID No.11所示；探针序列如SEQ ID No.12所示；

沙眼衣原体的正向引物序列如SEQ ID No.13所示、反向引物序列如SEQ ID No.14所示；探针序列如SEQ ID No.15所示；

解脲脲原体的正向引物序列如SEQ ID No.16所示、反向引物序列如SEQ ID No.17所示；探针序列如SEQ ID No.18所示；

生殖支原体的正向引物序列如SEQ ID No.19所示、反向引物序列如SEQ ID No.20所示；探针序列如SEQ ID No.21所示；

所述内源对照GAPDH基因的正向引物序列如SEQ ID No.22所示、反向引物序列如SEQID No.23所示；

所述阳性杂交点探针序列如SEQ ID No.24所示；

所述内源对照GAPDH基因的探针序列如SEQ ID No.25所示。

2.根据权利要求1所述的核酸探针组合，其特征在于，所述探针的5′端标记有用于固定至基因芯片上的连接基团。

3.根据权利要求2所述的核酸探针组合，其特征在于，所述连接基团为氨基。

4.根据权利要求1所述的核酸探针组合，其特征在于，各病原体的正向引物或反向引物5′端带生物素标志。

5.权利要求1～4任一所述的核酸探针组合在制备检测生殖道常见病原体的试剂或试剂盒中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述生殖道常见病原体包括人型支原体、奈瑟淋球菌、单纯疱疹病毒Ⅱ型、人巨细胞病毒、沙眼衣原体、解脲脲原体或生殖支原体中的一种或多种。

7.一种检测生殖道常见病原体的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1～4任一所述的引物组合的多重PCR反应液、表面固定有权利要求1～4任一所述的探针组合的膜芯片、ddH₂O和杂交试剂组成；膜芯片为表面固定有探针阵列的固相支持介质；

所述多重PCR反应液包括Taq聚合酶、UNG酶、MgCl₂、dUTP、dNTPs、C-PC、PCR缓冲液；

所述杂交试剂包括杂交液、杂交清洗液、酶标液、酶标清洗液I、酶标清洗液II和显色液；

所述C-PC为与所述阳性杂交点探针反向互补的寡核苷酸链，该寡核苷酸链的碱基序列如SEQ ID No.26所示。