[发明专利]一种蓝色素的生物制备方法

权利要求书

1.一种蓝色素的生物制备方法，其特征在于，以重组大肠杆菌为菌种，活化，活化的大肠杆菌接入发酵培养基上进行扩大培养，然后置于发酵罐中持续发酵，发酵过程中通入无菌空气，并维持发酵液的pH值在6.8~7.2范围内，发酵罐中残糖的含量小于1g/L时补料，继续持续发酵一段时间，分离纯化，得到蓝色素；

具体制备步骤如下：

（1）菌种活化：将重组大肠杆菌菌种置于温度为35℃~38℃、转速为170~200rpm的条件下进行过夜培养，得到活化的大肠杆菌；

（2）扩大培养：将活化的大肠杆菌接入发酵培养基上进行扩大培养，在温度为35~38℃，直至菌密度OD600值为12~18，得到接种种子液；

（3）发酵：将接种种子液置于发酵罐内进行持续发酵，温度为35~38℃，转速为200~1200rpm，发酵过程中通入无菌空气，发酵通气量为2~7m³/h，并用氨水维持发酵液的pH值为6.8~7.2，直至发酵至发酵罐内的残糖的含量小于1g/L进行补料；

（4）诱导表达：在菌种的生长期，加入诱导剂进行诱导表达蛋白；

（5）补料发酵：检测发酵罐中残糖残氮的含量小于1g/L，手动加入葡萄糖，使氨基氮含量在1~2g/L范围内，继续持续发酵6~10h，温度为35~38℃，转速为200~1200rpm，发酵过程中通入无菌空气，发酵通气量为2~7m³/h，并用氨水维持发酵液的pH值为6.8~7.2，得到含有蓝色素的发酵液；

（6）分离纯化：将含有蓝色素的发酵液冷冻干燥，抽去水分，得到蓝色素粗品，向蓝色素粗品加入热水进行打浆2h，过滤，并用热水洗涤至滤液为中性，将截留的物质经低温烘干，得到蓝色素产品。

2.根据权利要求1所述的一种蓝色素的生物制备方法，其特征在于，在步骤（5）中，含有蓝色素的发酵液中的蓝色素含量为1.95~2.20g/L。

3.根据权利要求1所述的一种蓝色素的生物制备方法，其特征在于，在步骤（6）中，冷冻干燥的温度为-60~-55℃；低温烘干的温度为30~35℃。

4.根据权利要求1所述的一种蓝色素的生物制备方法，其特征在于，在步骤（4）中，所述诱导剂为IPTG诱导剂；所述IPTG诱导剂的浓度为200mM。

5.根据权利要求1所述的一种蓝色素的生物制备方法，其特征在于，在步骤（1）、步骤（2）、步骤（3）和步骤（5）中的温度为37℃，在步骤（2）中的菌密度OD600值为15，在步骤（3）和步骤（5）中的发酵通气量为5m³/h。

6.根据权利要求1所述的一种蓝色素的生物制备方法，其特征在于，活化的大肠杆菌按照1%~10%（v/v）的接种量接入发酵培养基上。

7.根据权利要求1所述的一种蓝色素的生物制备方法，其特征在于，发酵培养基包括5.8 g/L 胰蛋白胨、3.6 g/L 酵母提取物、1.4 g/L K₂HPO₄、2.2 g/L KH₂PO₄、1 ml/L 甘油。