[发明专利]内质网应激对NLRP3影响在心肌缺血的模型构建

权利要求书

1.内质网应激对NLRP3影响在心肌缺血的模型构建，其特征在于：采用体内外模型进行缺血再灌注以构建心肌缺血模型，随后在实验过程中调节钙蛋白酶的含量变化以改变内质网应激的稳定性，最终通过比较心肌梗死面积和NLRP3蛋白表达水平以实现模型的论证作用。

2.根据权利要求1所述的内质网应激对NLRP3影响在心肌缺血的模型构建，其特征在于：包括以下步骤：

S1,进行体内外模型的缺血再灌注处理时通过Tunel及PI染色以检测心肌细胞是否引起焦亡；

S2,随后对缺血再灌注的模型通过检测GRP78及CHOP的变化以论证内质网应激的存在与否；

S3,利用caspase-1的抑制剂Ac-YVAD-CMK减轻焦亡，随后记录观察PI染色阳性情况；

S4,同时对离体的心肌细胞与在体的心肌细胞进行缺血再灌注处理，观察NLRP3炎症小体的激活情况；

S5，在动物实验中通过TTC染色检测心肌梗死面积，并通过钙蛋白酶的抑制剂PD150606对钙蛋白酶活性进行干预；

S6，通过比较钙蛋白酶变化情况及不同情况下的心肌梗死面积，明确钙蛋白酶与内质网应激变化的关系。

3.根据权利要求2所述的内质网应激对NLRP3影响在心肌缺血的模型构建，其特征在于：所述步骤S1中PI染色主要观察阳性细胞比率，并电显Caspase-1和IL-1β的变化情况。

4.根据权利要求3所述的内质网应激对NLRP3影响在心肌缺血的模型构建，其特征在于：所述步骤S2中区分为YVAD+缺血再灌注组和缺血再灌注组，对比PI染色阳性率表达情况。

5.根据权利要求4所述的内质网应激对NLRP3影响在心肌缺血的模型构建，其特征在于：所述步骤S4中用NLRP3siRNA抑制NLRP3炎症小体的活化来做进一步检测。

6.根据权利要求5所述的内质网应激对NLRP3影响在心肌缺血的模型构建，其特征在于：所述S6中进行MCC950抑制NLRP3炎症小体的活化，论证缺血再灌注引起的心肌细胞焦亡与NLRP3炎症小体的关系。

7.根据权利要求6所述的内质网应激对NLRP3影响在心肌缺血的模型构建，其特征在于：所述S6中对心肌细胞进行缺氧复氧处理，观察对照组及缺血复氧组心肌细胞中钙蛋白酶的表达水平发现缺氧复氧处理后钙蛋白酶的表达水平情况，同时对比心肌梗塞和损伤面积。

8.根据权利要求7所述的内质网应激对NLRP3影响在心肌缺血的模型构建，其特征在于：所述S6中调节钙蛋白酶的含量变化利用通过调控内质网应激及NLRP3炎症小体诱导细胞焦亡观测细胞损伤情况。