[发明专利]一种假型化病毒载体颗粒

说明书

本发明涉及包膜糖蛋白突变体以及包膜糖蛋白突变体制备慢病毒并提高病毒产量和滴度,涉及用于将生物材料转移到细胞中的假型化病毒载体颗粒，其中所述载体颗粒至少包含：嵌合包膜糖蛋白，其包含或由长臂猿白血病病毒(GalV)包膜糖蛋白的跨膜和胞外结构域与鼠白血病病毒(MLV)包膜糖蛋白的胞质尾结构域的融合体组成,其中胞质尾结构域缺乏融合抑制性R肽；或修饰的GalV包膜糖蛋白，其中胞质尾结构域缺乏融合抑制性R肽。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗领域。涉及一种具体涉及用突变体GalV糖蛋白提高慢病毒滴度。

背景技术

包膜蛋白Env(Envelop)是一种病毒外壳蛋白，它能够介导病毒颗粒附着在宿主细胞表面，进而与宿主细胞膜表面受体融合，在病毒感染宿主细胞过程中发挥重要作用。本发明的主要研究对象是长臂猿白血病病毒(Gibbon ape leukemia virus,GalV)的包膜蛋白(GalVEnv)，长臂猿白血病病毒是一种逆转录病毒。

逆转录病毒的包膜蛋白由胞外区、跨膜区、胞内区组成。胞外区可以和宿主细胞表面受体融合，融合后病毒遗传物质进入宿主细胞中。跨膜区由很短的21个氨基酸组成。当病毒颗粒附着在细胞膜表面时，病毒自身编码的蛋白酶会将胞内区部分约16个氨基酸(R肽)剪切，提高包膜蛋白融合能力，活化的包膜蛋白能够与宿主细胞表面受体融合，病毒遗传物质进入宿主细胞中从而开启了病毒的复制和组装。

有报道修饰狒狒内源性逆转录病毒(BaEV)包膜蛋白的胞质尾结构域使其缺乏抑制性R肽，修饰后的BaEV包膜蛋白包装慢病毒后滴度没有明显变化，然而他们是在野生型BaEV包膜蛋白基础上修改的，野生型BaEV包膜蛋白的胞内区不是病毒编码蛋白酶的天然识别序列。GalV包膜蛋白是工业界普遍使用的包膜蛋白，广泛的应用于基础科研和病毒液GMP生产，是基因治疗和细胞治疗的重要工具之一。通过修饰GalV的包膜蛋白，使其胞外区和跨膜区与胞内区病毒编码蛋白酶的天然识别序列融合，并使其缺乏抑制性R肽，能进一步提高病毒产量和滴度，既能够为基础科研应用提供强有力且高效的工具，又能为病毒液工业化生产带来规模化经济效益。有鉴于此，本领域急需改造和优化GalV 的包膜蛋白，提高病毒产量。

发明内容

一方面，本发明提供了用于将生物材料转移到细胞中的假型化病毒载体颗粒，其中所述载体颗粒至少包含：

-嵌合包膜糖蛋白，其包含或由长臂猿白血病病毒(GalV)包膜糖蛋白的跨膜和胞外结构域与鼠白血病病毒(MLV)包膜糖蛋白的胞质尾结构域的融合体组成,其中胞质尾结构域缺乏融合抑制性R肽；或

-修饰的GalV包膜糖蛋白，其中胞质尾结构域缺乏融合抑制性R肽。

一方面，本发明提供了使用本发明的假型化病毒载体颗粒，治疗造血功能障碍或免疫治疗血液瘤和实体瘤的方法。

另一方面，本发明提供了包含作为活性成分的根据本发明的假型化病毒载体颗粒的药物。

另外，本发明还涉及根据本发明的假型化病毒载体颗粒用于将生物材料离体转移到造血细胞或免疫淋巴细胞中的用途。

最后，本发明还涉及产生如上述定义的假型化病毒载体颗粒的稳定病毒包装细胞系。

发明详述

假型化病毒载体颗粒

本发明涉及用于将生物材料转移到细胞中的假型化病毒载体颗粒，其中所述载体颗粒至少包含：

-嵌合包膜糖蛋白，包含或由长臂猿白血病病毒(GalV)包膜糖蛋白的跨膜和胞外结构域与鼠白血病病毒(MLV)包膜糖蛋白的胞质尾结构域的融合体组成；或

-修饰的GalV包膜糖蛋白，其中胞质尾结构域缺乏融合抑制性R肽。