[发明专利]基于UPLC-MSMS检测工业大麻花叶中大麻素的方法

说明书

本发明涉及生物分析技术领域，特别是涉及一种基于UPLC‑MSMS检测工业大麻花叶中CBGA、CBG、CBC和CBCA含量的方法，通过UPLC‑MSMS检测出待测物在样品中的保留时间与标准工作溶液中的保留时间偏差数，定性分析是否含有目标物。对于含有目标物的样品溶液，进一步进行定量测定。通过外标法定量，UPLC‑MSMS检测出待测物监测离子峰面积，与标准曲线对比，计算出目标物在样品溶液中的浓度。通过添加回收率和相对标准偏差RSD验证本发明的准确度和精密度，表明本方法对CBGA、CBG、CBC和CBCA的提取效率良好，可以满足工业大麻中CBGA、CBG、CBC和CBCA的分析测试。

技术领域

本发明涉及生物分析技术领域，特别是涉及一种基于UPLC-MSMS检测工业大麻花叶中大麻萜酚酸(CBGA)、大麻萜酚(CBG)、大麻环萜酚(CBC)和大麻环萜酚酸(CBCA)的方法。

背景技术

黑龙江省汉麻种植面积达45.7万亩，按照国家汉麻战略产业联盟的规划以及汉麻研究中心给全国的汉麻种植安排，黑龙江省初步定在前期大概用10年的时间达到300万亩。

目前从大麻中已鉴定出约500种化合物。在这500余种化合物中最受研究者关注的就是大麻素。大麻素是特有的萜烯酚化合物，浓缩在植物毛状体产生的树脂分泌物中。这些毛状体主要集中在雌花序的特定部位。据报道，大部分的大麻素具有药用价值或医疗用途，例如：CBC的医疗用途为抗炎、抗肿瘤、抗抑郁、抗真菌、促进大脑生长等。CBG的药用价值：非精神活性成分，存在于大麻生长周期的早期，所以很难找到大量的CBG，这就意味着通过栽培大麻才能获得其医疗用途。CBG的医疗价值：可用为抗生素、可用于治疗银屑病、抗肿瘤、抗抑郁、止痛等。CBGA是CBG的前驱体，是大麻植株所产生的基础化合物。它对大麻生长有着保护作用，CBGA存在大麻花的毛状体中，并触发靶向植物细胞坏死，使大麻叶子得到自然“修剪”，为花体提供更多的生长能量。

随着黑龙江省工业大麻产业的持续发展，种植面积的逐渐增加，对工业大麻中具有药用价值的大麻素含量测定的需求也逐渐增大。为了量化新鲜植物材料中曾经存在的“总CBG含量”、“总CBC含量”，必须将CBGA的浓度添加到CBG的含量中，将CBCA的浓度添加到CBC的含量中。但是目前国内没有统一的对工业大麻花叶中CBGA、CBG、CBC和CBCA含量检测的标准和方法。

发明内容

本发明为了克服上述技术问题的不足，提供了一种基于UPLC-MSMS检测工业大麻花叶中CBGA、CBG、CBC和CBCA的方法。

解决上述技术问题的技术方案如下：

基于UPLC-MSMS检测工业大麻花叶中CBGA、CBG、CBC和CBCA的方法，包括以下步骤：

(1)前处理

将采集的花叶、叶片、种子、茎秆通风阴干，去除杂质后分别置于研磨器中研磨后，过50目筛，制成试样，并置于-18℃条件下保存；按照GB 5009.3测定样品中的含水量，计算试样中干物质的含量；

(2)提取和净化

精确称取待测样品0.1～1g，精确到至少0.01g，置于50mL离心管中，向离心管中加入90+10的甲醇-正己烷溶液25mL，涡旋提取15min，5000r/min离心3min；将上清液全部转移至50mL容量瓶中，再次向残渣中加入90+10甲醇-正己烷溶液25mL，涡旋提取15min，5000r/min离心3min，合并提取液，定容至50mL，混合均匀后取2mL混合液经0.22μm有机系滤膜过滤；

(3)检测

将步骤(2)得到的净化待测物经过UPLC-MSMS法进行检测；UPLC参数为：色谱柱：AcquityHSS T3(50mm×2.1mm，1.8μm)，柱温：35℃，流速：0.30mL/min，进样量：2μL，梯度洗脱条件如下表1所示：