[发明专利]一种基于荧光共振能量转移的GPC3检测方法

权利要求书

1.一种非诊断目的基于荧光共振能量转移的GPC3检测方法，按以下步骤进行：

步骤1：荧光共振供体AuCDs-GPC3_Apt的制备

(1)AuCDs的制备：往葡萄糖溶液添加HAuCl₄溶液，搅拌均匀，滴加脱水柠檬酸三钠（SCT）溶液继续搅拌、加热，反应完成后冷却、离心，得到AuCDs溶液；

(2)AuCDs-GPC3_Apt的制备：量取AuCDs和GPC3_Apt，在室温且避光的条件下搅拌混合一定时间，得到AuCDs-GPC3_Apt溶液；

步骤2：荧光共振能量转移的反应体系的构建

(1)称量Fe₃O₄/GO粉末，加入超纯水定容，破碎，分散，即得Fe₃O₄/GO分散液；

(2)将Fe₃O₄/GO溶液和AuCDs-GPC3_Apt溶液混合，孵育，使AuCDs的荧光淬灭，形成AuCDs-GPC3_Apt- Fe₃O₄/GO FRET反应体系；用荧光分光光度计进行扫描，固定激发波长为350nm，测量其440 nm处荧光强度，记作F0；

步骤3：GPC3工作曲线的绘制

(1)将不同浓度的GPC3溶液加入到AuCDs-GPC3_Apt- Fe₃O₄/GO FRET反应体系，孵育，用荧光分光光度计进行扫描，固定激发波长为350nm，测量其440 nm处荧光强度，记作F1；

(2)用(F₁-F₀)/F₀作为纵坐标，GPC3浓度作为横坐标，绘制工作曲线，计算出该方法的最低检测限；

步骤4：实际样品中GPC3的检测

(1)将待测样品加入到步骤2中的AuCDs-GPC3_Apt- Fe₃O₄/GO FRET的反应体系，孵育，采用荧光分光光度计进行扫描，固定激发波长为350nm，记录440 nm处的荧光强度变化；

(2)根据步骤3所得到的GPC3的工作曲线，计算待测样品中GPC3的浓度。

2.按照权利要求1所述的GPC3检测方法，其特征在于：步骤1中所述破碎时间为4h；Fe₃O₄/GO分散液浓度为2.0 mg/mL。

3.按照权利要求1所述的GPC3检测方法，其特征在于：步骤2中所述孵育温度为25°C，孵育时间为50分钟；缓冲液pH为6.5-7.5。

4.按照权利要求1所述的GPC3检测方法，其特征在于：步骤2中所述AuCDs-GPC3Apt浓度为200 nmol/L。

5.按照权利要求1所述的GPC3检测方法，其特征在于：步骤3和步骤4中所述孵育温度为25°C，孵育时间为140分钟。